苯并芘（BaP）酶联免疫分析（ELISA）说明书

1 苯并芘（BaP）酶联天然免疫科学研究定性按量数据探讨了解（ELISA） 微生物培养基盒利用代表书 本微生物培养基盒仅限于科学研究利用。 1 利用目的意义： 本微生物培养基盒控制鱼、虾和微冻食品阻止（如鸡、牛羊肉和牛肉），植被油等中苯并芘（BaP）残 留的化学发光法查测。 2 实行运转基本原理 本微生物培养基盒用价格的竞争 ELISA 的的办法，在纳米纤维板包被有苯并芘（BaP）偶联抗原，下载苯并芘 （BaP）规范准则品或备样，分散苯并芘（BaP）与纳米纤维条上预包被的苯并芘（BaP）偶联抗原互 相价格的竞争抗苯并芘（BaP）表面层抗原抗体阳性酶记号物，用 TMB 底物显色，下载终结液后色泽由蓝色的改成 蓝色，用酶标仪在 450nm 可见光激发光谱下实行查测，吸光值与备样中苯并芘（BaP）纯度成正比，通 过规范准则的斜率方程求算备样中苯并芘（BaP）的纯度。 3 微生物培养基盒主成 3.1 预包被的苯并芘（BaP）偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12 孔×8 条）。 3.2 苯并芘（BaP）规范准则品：6 瓶（1ml/瓶），纯度各分为是： 0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。 3.3 抗苯并芘（BaP）表面层抗原抗体阳性酶整合实际物：1 瓶（6ml）。 3.4 显色液 A：1 瓶（6ml）。 3.5 显色液 B：1 瓶（6ml）。 3.6 终结液：1 瓶（6ml），2M 硝酸钠钠。 3.7 范例配制液：1 瓶（10×, 6ml），控制备样配制用。 3.8 沉淀干洗液：1 瓶（20×，20ml），控制洗板。 3.9 代表书一场。 4 需要 而未带来了的文件 4.1 产品 4.1.1可见光激发光谱450nm酶标仪。 4.1.2破碎机。 4.1.3量筒。 4.1.4震荡器。 4.1.5漏斗。 4.1.6Whatman 或很的过过滤清洁棉。 4.1.7重度移液器。 4.2 微生物培养基 4.2.1去亚铁亚铁离子水或减压去亚铁离子水。 4.2.2 甲醇。 5 日常的储存 5.1 微生物培养基盒日常的储存于2~8℃，切记不可能微冻 5.2 未用完的纳米纤维板要抽真空太干手机截图 6 小心方式的办法 6.1 利用微生物培养基盒前请非常仔细阅读文章代表书。 2 6.2 不可能利用有效期微生物培养基盒。 6.3 微生物培养基盒利用前，将微生物培养基恢复功能原状至恒温（25±2℃），意见和建议起码回温2天。 6.4 规范准则品中具有苯并芘（BaP），利用要特别的小心，控制要带胶手套。 6.5 终结液中具有硝酸钠钠，利用时杜绝烫伤皮肤好及腐蚀性衣服。 6.6 各个规范准则品、备样所要吸头可能混用，这样会不良现象试验报告结局。 6.7 各个批号微生物培养基盒中的微生物培养基不能混用；各个规范准则品、备样所要吸头不能混用，这样会不良现象 实行运转结局。 6.8 配制范例时需要用本微生物培养基盒中的范例配制液，这样会不良现象实行运转结局 6.9 搭配微生物培养基要不能起泡。 7 运转液安排 7.1 苯并芘（BaP）规范准则品硫酸铜水盐饱和溶剂：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb 7.2 沉淀干洗液：用减压去亚铁离子水按1:20(1+19)配制备品 7.3 范例配制液：用减压去亚铁离子水按1:10(1+9)配制备品 7.3 显色剂：已备品，不能光直照 7.4 不良现象终结液：已备品 8 备样解决系统软件（备样在领取具体实行中，要严苛按代表书控制，领取具体实行中应精确性配制，这样 会经常出现结局不精确性，备样要手机截图在阴暗处闭光小细节及食品冷藏手机截图） 8.1取10g破碎的备样，加 20ml 70%甲醇硫酸铜水盐饱和溶剂 8.2全力震荡三分钟 8.3用Whatman 过过滤清洁棉过滤清洁 8.4取25µl解决后的备样，下载25µl范例配制液于不良现象孔中（范例配制质数和合数为2） 9 酶免科学研究定性按量数据探讨了解实行 9.1 实行运转流程 9.1.1 实行运转展开前请将大部分微生物培养基于盒外完全恢复功能原状至恒温（25±2℃），日期约2天。回温至室 温（25±2℃）后再卸下来纳米纤维条，已有的纳米纤维条相似抽真空可能于2~8℃太干手机截图 注：很大保证质量回温完全，这样不良现象查测的度和精确性度。 9.1.2 利用后请可能将微生物培养基放回2~8℃手机截图 9.1.3 请不可能优化科学研究定性按量数据探讨了解系统软件 9.1.4 请利用的重度移液器 9.1.5 控制倘若展开，请不可能间歇全部的系统软件 9.1.6 ELISA结局的可相似性从而度的决定于于控制系统软件，请严苛决定规定控制 9.1.7 为不能交差污染破坏，每一位规范准则品和备样均应利用各个的吸头加样 9.1.8 加样时严禁让吸头学习纳米纤维中的硫酸铜水盐饱和溶剂或内表面层 9.2 科学研究定性按量数据探讨了解实行 9.2.1 要提前实行识别码，记号B0、规范准则品和备样的选址，最新推荐实行双孔查测 9.2.2 取流程數量的纳米纤维（纳米纤维条可拆），将已有板条相似抽真空并可能放回2~8℃手机截图 9.2.3 备样配制液（10×）、沉淀干洗液（20×）配制成运转液(减压去亚铁离子水或去亚铁亚铁离子水配制) 9.2.4 在B0孔中下载50µl0.0 ng/ ml规范准则品硫酸铜水盐饱和溶剂 9.2.5 在各规范准则孔中下载50µl的规范准则品硫酸铜水盐饱和溶剂 9.2.6 在各备样孔中下载50µl备样硫酸铜水盐饱和溶剂 9.2.7 在大部分孔中下载50µl的抗苯并芘（BaP）表面层抗原抗体阳性酶整合实际物 9.2.8 轻松乱晃不良现象板几分钟。 9.3 37℃温浴30min （温浴具体实行中隔三差五轻拍不良现象板，可能减掉双孔随机计算粗差） 9.3.1 甩掉孔中液状体，用洗液干洗纳米纤维板5次，zui后一场应在吸水性白纸敲打以*出掉孔中液 3 体。 9.4 不良现象 9.4.1 干洗系统软件完工后，可能用重度移液器在每一位纳米纤维中先下载50µl显色液A，加上 50µl显 色液B；重度乱晃不良现象板使之*混匀 9.4.2 37℃温浴10min 9.4.3 每孔中下载50µl终结液，混匀 9.4.4 在450nm下查测吸光度，结局在5min内读取硬盘。 10 结局求算 10.1化学发光法科学研究定性按量数据探讨了解 10.1.1所兑换的每一位氧氨水溶液含量规范准则硫酸铜水盐饱和溶剂和范例吸光度值的评准则差（B）除于*个规范准则（0规范准则） 的吸光度值（B0）再乘上100%，即百分吸光度值。 B—规范准则硫酸铜水盐饱和溶剂或范例硫酸铜水盐饱和溶剂的评均吸光度值 B0—0µg/L规范准则硫酸铜水盐饱和溶剂的评均吸光度值 10.1.2以苯并芘（BaP）氧氨水溶液含量的多数计算临界值X轴，百分吸光度临界值Y轴，作图规范准则的斜率方程图。跟据 备样百分吸光度值，可从的斜率方程上实现对照点的横经纬度，当以苯并芘（BaP）氧氨水溶液含量的多数计算值， 求得反多数计算当以探讨液中苯并芘（BaP）氧氨水溶液含量C（ppb） 10.1.3可能备样经过了了要提前配制，对此跟据规范准则的斜率方程得到的出的备样氧氨水溶液含量很大要再乘上其配制 质数和合数。 10.2 半化学发光法探讨 10.1.1估测半化学发光法探讨：前提决定一种适度的规范准则液与备样同操作，跟据备样与规范准则品吸光 度值的低高非常，诊断备样氧氨水溶液含量值是高于最好高于规范准则值。 10.1.2实验室设备半化学发光法探讨：前提决定一种适度的规范准则液与备样同操作，跟据备样与规范准则品色泽 高低非常，诊断备样氧氨水溶液含量值是高于最好高于规范准则值。 11 特情人 物资 交差不良现象 苯并芘（BaP） 100% 12 微生物培养基盒参数表 本微生物培养基盒查测底限为0.05ppb B0吸光度*值应高于1.0 微生物培养基盒吸光度板内随机计算粗差高于8％，板间随机计算粗差高于15％。 用本代表书带来了的阻止范例领取的的办法利用率高于80％。 13 微生物培养基盒带来了的规范准则的斜率方程领域为0.1ppb~8.1ppb。 14 科学研究定性按量数据探讨了解受限制 本微生物培养基盒查测为抗体阳性的备样要用另一类种的的办法如HPLC或GC/MS恰当确证。