细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒实验步骤

YIJI上皮细胞内腐蚀应激性可溶性氧超氧阴阴阳离子红白色荧光法测定实验试剂盒产品详细使用说明（汉语版）

主要装途

YIJI体细胞内脱色应激性渗透性氧超氧阴阴阳离子红色的荧光测得采血管都是种目的可以通过透膜荧光复染剂二氢溴化乙啶，在神经神经细胞被氧化环境下，呈现红色的荧光，来检查测量神经神经细胞内超氧阴阳离子抗逆性氧族的转换和添加的而经点的技能应用策略。该技能应用经过了用心生产、胜利试验证明信的。不错被代替细胞系凋亡、警报传达、苍老、排泄和营养价值学等的的研究。物料标准没有细菌，即到即用，操控简单的，活体检项目测，使用性能可靠。

方法大环境

超氧优质基阴铁离子（superoxide radical；O2-）、过硫化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自在基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化的基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧什么是自由权基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧什么是自由权基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴正离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌只有基（semiquinone radical）、单线态纯氧（singlet oxygen）等生殖组织细胞内催化活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的引起和增长，将促使生殖组织细胞显老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）就是一种*人权可以通过神经生殖细胞结构，并在神经生殖细胞内长时延误而不漏出的染色的剂。可能被超氧任意基阴化合物被氧化，二氢溴化乙啶转化率为溴化乙啶，到组织核，与DNA融洽整合，便形成荧光。上述证明怎么写组织细胞内超氧阴正离子催化活性氧族的都存在。 

物料网站内容

YIJI深度清理液（Reagent A）    毫升

YIJI固色液（Reagent B）    微升

YIJI兑水液（Reagent C）    毫升

YIJI保护液（Reagent D）    毫升

食品说明怎么写书    1份

另存方案

留存YIJI染料液（Reagent B）在－20℃冷库里，标准减少太阳光；任何的包存在4℃冰柜里；更有效有保障6月

用户账户专用

胰蛋白酶酶乙二胺四乙酸混合式液（GMS12024）：于細胞打破

*神经元陪养液（GMS12052）：适用于神经元操控需用的陪养基

15毫升圆锥形抽滤管：采用癌细胞运营的烧杯

1.5毫升离心式管：使用在内部印染的储槽

培植箱：应用于体现孵育

血受损细胞膜筛选仪：适用于受损细胞膜筛选

台式电脑抽滤机：于试品操作使用

比色皿或96孔板：采用荧光酶联免疫法介绍的不锈钢容器

人体细胞膜流式细胞膜仪：用来人体细胞膜荧光深入分析

（共凝焦）荧光显微镜：用做查看荧光受损细胞

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：广泛用于人体细胞荧光一定量概述

工作步骤之一

• 外源性法

测试開始前，将－20℃墙上里的实验试剂盒中的YIJI着色液（Reagent B）插入冰槽里化开，YIJI溶解液（Reagent C）装进37℃控温水糟里打火。然而退出xx微升YIJI染色剂液（Reagent B）到新的1.5毫升抽滤管，成为xx微升YIJI配制液（Reagent C），混匀后，记号为YIJI复染做工作液，置于暗室里。接着使用下类运营。

• 提供1瓶25cm2肿瘤肿瘤细胞致力于瓶的待测肿瘤肿瘤细胞
• 仔细抽去細胞培植液
• 放入xx毫升 YIJI清扫液（Reagent A）到癌细胞激发瓶，所覆盖激发瓶表面上
• 心抽去YIJI清除液（Reagent A）
• 添加1毫升使用者配备的胰血清酶乙二胺四乙酸混合着液，填满整一个塑造正等轴测图
• 置于37℃提升箱五分种
• 震动塑造培养瓶，使神经细胞离开
• 下载4毫升业主自带的*血细胞养成液
• 移入15毫升球形离心力管，完全混匀（目光：自动隐藏细胞核单独从相应过程就开始）
• 移取10微升在血神经元数值仪勤奋努力行神经元数值
• 踢出1 X 106血细胞到新的15毫升圆锥形离心法管
• 加进台式电脑离心力法机离心力法五小时，车速为300g
• 小心留意抽去上清液
• 成为xx毫升有YIJI印染液（Reagent B）和YIJI稀释溶解液（Reagent C）的YIJI刺绣工做液，轻盈混匀
• 装进37℃恒溫水糟孵育20几分钟，防止出现光线
• 放进台式电脑抽滤机抽滤分之五钟，速度快为300g
• 小心一点抽去上清液
• 申请加入预冷的xx微升YIJI留存液（Reagent D），轻快混匀生殖细胞颗料群
• 倒入冰槽里
• 选取下列关于方式方法之中开始操作的：
  • 即可去细胞核流式的仪分享：藻红淀粉酶（phycoerythrin；PE）股票波段，观查50000个体细胞上――

波峰右移，意味着超氧阴阳离子分量高

• 或运用（共凝聚）荧光显微镜查看（定量分析验测）：

1）移取10微升以上細胞悬液到载波片上，扣上盖玻片

2）激励激发光谱540nm，发出激发光谱590nm――

色荧光怎强，得出结论超氧阴铝离子水分含量高

• 或适用荧光分光光度仪或荧光酶标仪监测（一定量监测）：

1）移取400微升这些组织细胞悬液到1毫升比色皿

2）放入xx微升YIJI保存文档液（Reagent D）

3）横竖堆放混匀次数

4）倒入荧光分光光度仪：提升吸光度540nm，散热吸光度590nm――

RFU增强，表示超氧阴亚铁离子量高

• 直接性法

實驗着手前，将－20℃冰箱保鲜里的实验试剂盒中的YIJI固色液（Reagent B）嵌入冰槽里开始融化，YIJI稀释溶液液（Reagent C）放进去37℃恒温性比较好地漏里暖机。第二步移到xx微升YIJI脱色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心法管，参加xx微升YIJI调制液（Reagent C），混匀后，标记符号为YIJI固色的工作液，复制图层暗室里。进而来下面操作流程。

1．提供2个癌癌神经元致力于24孔板的待测癌癌神经元，癌癌神经元布满率达70％

（注意力：能应用载玻片，载玻片提升皿，35mm提升皿，和另一个提升孔板，见注重细节5）

2．小心翼翼抽去癌细胞致力于液

3．关注朝着孔壁放入xx微升所含YIJI染色的液（Reagent B）和YIJI稀释溶液液（Reagent C）的

YIJI复染运转液到1个大概人体细胞提升孔，涵盖提升孔外表面

4．装入37℃细胞膜陪养箱里孵育20半个小时

5．格外小心抽去包含有YIJI刺绣事业液 

6．细心两条路孔壁成为xx微升37℃发动机预热的YIJI保留液（Reagent D）到血细胞养成孔

7．选择下面办法组成实行基本操作：

（A）动用倒放荧光显微镜观察植物（明确检查）：

激发起光波激发光谱540nm，释放光波激发光谱590nm――橙红色荧光明显增强，显示超氧阴硝酸根离子水平高

• 选择荧光分光光度仪或荧光酶标仪检验（参考值检验）：

弄进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发起主吸光度540nm，挥发主吸光度590nm――RFU提升，得出结论超氧阴硝酸根离子含锌量高

小心特别注意

• 本车辆为20次（1毫升系统）或40次（0.5毫升系统）作业
• 操作的时，须戴半指手套
• 孵育时，避开阳光照射
• 本类产品适当种种尺寸规格的培育癌细胞：载玻片，载玻片培训皿，35mm培训皿，和各项培训孔板，须相关联的调整基本操作用药量：

• 
  会按照体细胞类型的，调正YIJI染色法业务液实用分子量（1：200至1：1000存储容量比），避开过多染色的
• 提醒组织肿瘤细胞复染成功完成后，立即对其进行组织肿瘤细胞荧光阐述 
• 增强吸光度还可以选择在485至540nm互相，散发出来吸光度565至610nm互相
• 本总部而且展示 系列作品超氧阴化合物几丁质酶氧查重实验试剂食品

高国家标准

• 本设备经认定特性动态平衡
• 本货品经司法鉴定荧光比较清楚