IL-16的检测

即以前的淋巴细胞趋化因子（1ymphocytechemoattractantfactor，LCF）。主要由CD8+T淋巴细胞产生，对T淋巴细胞特别是CD4+细胞具有选择性趋化作用。

（1）IL-16的诱生
1）分离PBMC，调整细胞浓度为3X106／mL，加入平底培养板中，置37℃5％C02温箱培养。
2）加入血清素（serotonin，即5-羟色胺），使终浓度为10—4moL／L，培养24h，离心收获上清用于IL-16活性检测。

（2）IL-16的测定：可根据IL-16对淋巴细胞的趋化作用测定其活性。
1）用尼龙棉分离法分离外周血中T淋巴细胞。
2）用RPMI-1640培养液将分离的T细胞或CD4+T细胞配成5X106—lO7／mL。
3）取48孔趋化板，底板各孔加入30／uL不同稀释度的标准品或待测样品，并设培养液对照孔，均做3复孔。在培养板之上覆以8um孔径的硝酸纤维素膜，小心让膜与样品溶液接触，不能有气泡及不让各孔中的液体相混。
4）盖上顶板并固定。用0．2mL培养液洗涤各上孔，洗去固定时可能滤人上孔的样品溶液。在顶板各孔中加入50／uL（约2．5X105～5X105）细胞悬液，置37~C 5％C02温箱中孵育3h，让细胞从膜上面向下趋化运动。
5）小心取下膜，洗去膜上表面的细胞，并将膜下表面（粘附着趋化的细胞）向上置玻璃板上，固定细胞，用苏木精染色细胞。
凸）在高倍显微镜下计数趋化的细胞，以对照孔每视野约10个细胞的浓度，计数5个视野的全部细胞。取3个重复孔细胞的平均数。结果以％表示：
趋化％=试验孔细胞数／对照孔细胞数×100％

（3）注意事项：多种细胞因子具有趋化活性，如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等。可用针对不同细胞因子的中和抗体作中和实验对照以了解趋化活性的特异性。实验时可将适量的中和抗体与细胞因子样品一起加入底板各孔中，37℃作用15min，然后盖上顶板，加入细胞。如上进行趋化试验，并比较中和抗体对照与试验孔的结果可区分不同趋化因子的作用。