鱼类胰岛素生长因子-1（IGF-1）定量检测试剂盒（ELISA）

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 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

鱼儿胰岛素植物生长系数-1（IGF-1）一定量查测生化试剂盒（ELISA）

采用表明书

【试剂盒名称】

虾类胰岛素发展指数公式-1（IGF-1）化学发光法的检测免疫试剂盒（ELISA）

【试剂盒作用】

酶联免疫法在线检测鱼血清、血浆及有关系夜体范本中类胰岛素产生细胞-1（IGF-1）的含量。

【检测操作过程】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被蟹类胰岛素的生长成分-1（IGF-1）单克隆抗体阳性透明色酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加上入酶标工作上液，温育充足时间间隔后，洗涤剂祛除未搭配的化学物质。由小到大参与底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化的物酶（HRP）催化反应下转换成为蓝颜色代谢物，在酸的用下转化为黑色，颜色的深浅与样品中鱼儿胰岛素萌发成分-1（IGF-1）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中蟹类胰岛素生长发育细胞因子-1（IGF-1）含量。

【试剂盒组建】

备注名称：标品（1号→6号）渗透压从左到右为：24、12、6、3、1.5、0.75 μg/L.

【要求而未提拱的化学制剂和用具】

1、37℃常温箱

2、基准尺寸规格酶标仪

3、精密五金移液器及做次性吸头

4、分馏水

5、一次性地性试管

6、吸潮纸

【操作步骤】

1、工作：从冷库取出来生化试剂盒，常温复温平衡性30半小时。

2、配液：用减压纯净水将20倍浓缩液清洗液兑水成原倍的清洗液。

3、加规范标准品和待测范例：取一定数目的酶标包被板，不变于构架上，分开 配置规则规定化品孔、待测样表孔和空白的对比孔，信息各孔位置上，在规则规定化品孔里添加入规则规定化品50μL；待测子范例孔中先融入待测子范例10μL，后加范例摇匀液40μL（即子样本稀释溶液5倍）；没字比较孔不添加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液状体，吸潮A4纸拍干，每孔完成清洗液，静置1min，甩去清洗液，吸附A4纸拍干，一样相似洗板4次（也要用洗板机按说明怎么写书进行操作洗板）。

6、加酶标岗位液：每孔参与酶标岗位液50μL，空白的剖析孔没有加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去流体，容易吸水一张纸拍干，每孔油满洗滌液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，吸水能力紙上拍干，都是这样从复洗板4次（也该用洗板机按说书进行操作洗板）。

9、显色：每孔先参加显色剂A 液50μL，另加入显色剂B液 50μL，iPad混匀器混匀30s（或手去轻轻地自激振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、撤销：拿掉酶标板，每孔加停止液50μL，结束发应（样色由绿色立转金色）。

11、检测：以留白孔调零，在结束后157分钟内，用450nm光波长在测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算公式：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【子样本追求】

1、样板不能含叠氮钠（NaN₃），是因为叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、生物标本采集程序后更快地通过拆分，拆分按相关资料通过，拆分后应负快通过工作。若不可能及时校正，可将组织切片放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实践严苛采用代表书的运行使用，实践后果判别肯定以酶标仪读数为基准。

2、酶标包被板打开后后如未用完，应立马放到胶封袋内加变干剂存放。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、谨记样品都已经 配制5倍，计算出来数据乖以5不是范本实践含量。

5、本免疫试剂盒化学发光法领域为0.75-24μg/L，超过了此范围内，为标准线性连通测算增值税，不为你的精准的一定量数据，请使用特俗摇匀液摇匀后测试精准的数据（0.75-24μg/L面积内），相乘总做好稀释工作陪数就是指子样本zui终溶度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为规避重叠水污染，标准化品、样版和乱码差表每加一款就得修改一场吸头；酶标事业液、模板调制液和底物等共同多组分，要悬臂加样，不应碰倒纳米纤维；不得当反复食用封板膜。

8、免疫免疫试剂盒保鲜期内用到，不一样的批号的免疫免疫试剂没法混用。

9、底物B对光脆弱，以免 长时刻被暴露于光下。

【操作程序总结】

安排免疫试剂，样品英文和要求品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【验测条件】

0.75μg/L - 24μg/L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月