牛活性维生素D3（VD3）定量检测试剂盒（ELISA）

上海J9九游中国实业有限公司主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。并代理销售Sigma、America 、等多个国外。
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 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

牛活力性维D3（VD3）酶联免疫法检查测量化学药品盒（ELISA）

选用表示书

【微生物培养基盒简称】

牛生物维D3（VD3）降钙素原检测检验化学药品盒（ELISA）

【试剂盒不同的用途】

化学发光法查测牛血清、血浆及对应液态范例中几丁质酶维生素ED3（VD3）的含碳量。

【检测的基本原理】

本制剂盒运用双抵抗能力三步夹心酶联免疫性吸咐法（ELISA）。将标品、待测样本量注入到二次包被牛催化活性维他命D3（VD3）单克隆抗原透明化酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，多加入酶标事业液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过被化合物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的用处下弄成蓝色，颜色的深浅与样品中牛活性氧VD3（VD3）浓度呈正涉及到的，450nm光谱下检测法OD值，给出细则品和样本的OD值，来计算范例中牛可溶性维生素cD3（VD3）水分含量。

【试剂盒构成】

备注栏：标品（1号→6号）酸度逐一为：800、400、200、100、50、25 μg/L.

【需求而未出具的免疫试剂和专业设备】

1、37℃恒温恒湿箱

2、标准尺寸酶标仪

3、细密移液器及一个性吸头

4、减压纯水

5、一场性试管

6、容易吸水纸

【操作步骤】

1、準備：从冷藏柜取下实验试剂盒，常温复温动态平衡30秒钟。

2、配液：用蒸溜水将20倍浓缩提炼洗衣液就稀释成原倍的洗衣液。

3、加规范品和待测样品：取任何规模的酶标包被板，统一于方框上，各装置规则单位品孔、待测模板孔和空白图片参考孔，备案各孔角度，在规则单位品孔内加入规则单位品50μL；待测样版孔中先加如待测样版10μL，另加范例做好稀释工作液40μL（即范例摇匀5倍）；留白差表孔要加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去气体，吸水性A4纸拍干，每孔加完洗滌液，静置1min，甩去洗洁液，吸附白纸拍干，都是这样重复使用洗板4次（也该用洗板机按描述书控制洗板）。

6、加酶标工做液：每孔融入酶标工做液50μL，空白图片剖析孔不带。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去介质液体，吸水能力白纸拍干，每孔加完洗衣液，静置1min，甩去干洗液，容易吸水A4纸拍干，尽管重复使用洗板4次（也能够用洗板机按就产品说明基本操作洗板）。

9、显色：每孔先添加显色剂A 液50μL，多加入显色剂B液 50μL，平板电脑苹果混匀器混匀30s（或手去悄悄振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、停止：拆下酶标板，每孔加终结液50μL，暂停影响（的颜色由蓝立转黑色）。

11、分析：以空缺孔调零，在终结后15半个小时内，用450nm光波波长侧量各孔的吸光值（OD值）。

12、来计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样例规定】

1、样例不能含叠氮钠（NaN₃），毕竟叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、样本采集器后尽快及早展开取出，取出按有关的期刊论文展开，取出后尽义务快展开实践。若没办法随时试验装置，可将样本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、展开實驗认真依照使用手册书的控制展开，展开實驗结果显示辨别需求以酶标仪读数算起。

2、酶标包被板打开使用后如未用完，应请马上倒入密封隔绝袋里添加干热剂导出。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、记住样品早已经扑灭5倍，算但是乖以5才行样例具体密度。

5、本化学药品盒参考值范畴为25-800μg/L，突破此使用范围，为标准曲线拟合不断延展计算公式得到，不被称为精确无误化学发光法的导致，若要特殊的稀释液液液稀释液液后核查精确无误的导致（25-800μg/L范围图内），相乘总调制质数和合数就是范本zui终含量。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为解决重叠污染破坏，规范标准品、范本和空白图片比每加是一个也要换一次性吸头；酶标工作中液、子样本稀释溶解液和底物等公益性混合物，要悬臂加样，不得当碰着微小孔；不宜多次重复安全使用封板膜。

8、微生物培养基盒存放期内施用，不同的批号的微生物培养基不可以混用。

9、底物B对光太敏感，减少长時间露出于光下。

【操作程序总结】

需备生化试剂，样板和规格品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【判断面积】

25μg/L- 800μg/L

【规格】

48人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月