PI 凋亡检测试剂盒产品详情

产品说明：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为 35.8 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将 FITC-Annexin V 与 PI 匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。

实际操作方式 ：

1、 用 27ml 的去阴离子水调制 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每一次的用 3ml。

2、 获得生殖体细胞（1×106 个/次），并且用冷的 PBS 清洗。（相对 贴壁生殖体细胞，先用胰酶消化系统，就用 PBS 清洗）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 飘浮血细胞，300×g 抽滤 10min，弃上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重悬体細胞，使体細胞的导热系数达标 1×106 个/ml。

5、 每管参与 100μL 组织细胞（1×105 个）。

6、 再向管内建立 5μL Annexin V-FITC。

7、 温度，阴凉，轻柔地混匀，10min。

8、 加入到 5μL PI，在常温，闭光，孵育 5min。

9、 成为 PBS 至 500μL，缓缓的混匀。

10、在 1 小的时候间用流式的体细胞仪检侧。1、 用 27ml 的去铝离子水做好稀释工作 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每一次的用 3ml。

2、 收藏上皮細胞（1×106 个/次），接下来用冷的 PBS 洗衣机清洗。（对贴壁上皮細胞，先用胰酶助消化，在用 PBS 洗衣机清洗）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 悬浮物人体细胞，300×g 抽滤 10min，弃上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重悬内部系，使内部系的规格高达 1×106 个/ml。

5、 每管加如 100μL 细胞系（1×105 个）。

6、 再向分液漏斗成为 5μL Annexin V-FITC。

7、 高温，背光，悄悄地地混匀，10min。

8、 注入 5μL PI，制冷，背光，孵育 5min。

9、 放入 PBS 至 500μL，慢慢的混匀。

10、在 1 小時间用流式体细胞体细胞仪检测工具。
 

注意事项：

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏产物，在保持与控制时请要注意阴凉。

3、Propidium iodide（PI）能进行皮肤特效吸纳，对眼腈有刺激使用使用。

4、在细胞核干洗的后一大步，请要尽可能的将上清弃净，尽量 PBS 残余损害实践結果

5、PI 上色的的事件较长有可能发生查重的凋亡率值高，最好首行 Annexin V-FITC 上色的的，上机前 两分鐘加个入 PI 上色的的。

6、整个的作业的过程工作要尽可能的轻缓，勿使劲吹打生殖细胞，尽可能的在 4℃下作业。