黄曲霉素试剂盒使用说明书

黄曲霉素（AF）酶联天然免疫介绍（ELISA）

化学试剂盒实用操作说明怎么写书

本微生物培养基盒仅限探究用到。

1 施用依据：

本微生物培养基盒应用在在线检测饲料添加剂和粮食中黄曲霉素（AF）浓度。

2 实验性远离

本化学制剂盒利用单独激烈 ELISA 做法，在微小孔板包被有黄曲霉素（AF）偶联抗原，加进黄曲霉素（AF）规范标准品或试品，矿酸黄曲霉素（AF）与微孔板条上预包被的黄曲霉素偶联抗原之间行业竞争抗黄曲霉素（AF）抵抗能力酶箭头物，用 TMB 底物显色，参与中止液后顏色由蓝色的调成茶色，用酶标仪在 450nm 光谱下实施检则，吸光值与产品的样品中黄曲霉素（AF）浓度负相关，完成标准化曲线美计算出来样机中黄曲霉素（AF）的纯度。

3 化学药品盒组成的

• 预包被的黄曲霉素（AF）偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12 孔×4 条）。

• 黄曲霉素（AF）要求品：6 瓶（1ml/瓶），含磷量各分为是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。

• 抗 AF 免疫抗体酶搭配物：1 瓶（3ml）。

• 显色液 A：1 瓶（3ml）。

• 显色液 B：1 瓶（3ml）。

• 解除液：1 瓶（3ml），2M 硫酸钠。

• 样板掺水液：1 瓶（10×,   3ml），适用于合格品直接稀释就可以用。

• 浓缩造成干洗液：1 瓶（20×，20ml），用来洗板。

• 讲解书一个。

• 须得而未可以提供的材料

4.1 系统

4.1.1光波波长450nm酶标仪。4.1.2粉粹机。4.1.3量筒。4.1.4谐振器。4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相等于的过滤纸。

4.1.7进样器移液器。

4.2 化学制剂

4.2.1去化合物水或水蒸气纯净水。

4.2.2 甲醇。

• 存贮

• 生化试剂盒茶叶保存于2~8℃，不要急冻

• 未用完的微小孔板理应填料密封干燥的导出

6 主意事由

• 施用制剂盒前请认真仔细了解说书。

• 最好不要运行超期生化试剂盒。

1

• 实验化学试剂盒的使用前，将实验化学试剂修复至环境温度（25±2℃），提醒一定回温2钟头。

• 要求品中包含黄曲霉素（AF），选用时该特意注重，的操作时该带乳胶手套。

• 撤销液中有效硫酸钠，的使用时制止伤害皮肤特效及灼伤衣服。

• 有差异标准规定品、备样所有吸头不是混用，要不然会危害实验设计的结果。

• 各种区别批号采血管盒中的采血管不得不不混用；各种区别规则品、印刷品选用吸头不得不不混用，除非会影响力工作然而。
• 兑水范例时一定要用本采血管盒中的范例兑水液，反之会应响实验性最终结果

• 混杂生化试剂时需逃避起泡。

7 岗位液需要准备

7.1黄曲霉素（AF）标准的品溶剂：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

• 果汁洗衣机清洗液：用水蒸气蒸溜水按1:20(1+19)摇匀预备

• 范例溶解稀释液：用分馏水按1:10(1+9)直接稀释就可以预备

• 显色剂：已应急，以免自然光直照

• 发应撤消液：已应急

8 原辅料解决方式（原辅料在分离出步骤中，要按照严格按代表书进行，分离出步骤中应精确配制，甚至

会突然出现没想到不精准的，样件不得储存图片在背阴遮光的地方及要在冷藏室储存储存图片）

8.1取10g搅碎的土样，加 20ml 70%甲醇水溶液

8.2双固谐振3秒钟

8.3用Whatman 筛选棉筛选

8.4取25µl加工后的样板，假如25µl模本配制液液于生理反应孔中（模本配制液质数和合数为2）

9 酶免进行分析布骤

9.1 实践需知

• 研究开端前请将那些微生物培养基于盒外加以恢复功能至室内温度（25±2℃），期限约2天。回温至空调温度（25±2℃）后再卸下来砂芯过滤器条，不需要的砂芯过滤器条重复封闭实时于2~8℃烘干留存注：固定切实保障回温充足，如果印象验测的度和明确度。
• 用到后请立即將制剂放回2~8℃保留

• 请别转换概述步骤

• 请施用的少量移液器

• 实操若果就开始，请要出现异常随便程序流程图

• ELISA然而的可再次性诸多度的是源于于方法小程序，请标准遵循规定方法

• 为应对相互被污染的，每项标淮品和样本均点应用不一样的的吸头加样

• 加样时切勿让吸头接处微小孔中的液体或内表面层

9.2 定性分析操作步骤

• 二次做好代码，标注B0、标准单位品和试品的地点，推建对其进行双孔在线检测

• 取所需要的数据的纳米纤维（纳米纤维条可拆），将太多板条全新密闭并可以放回2~8℃存储

• 土样配制液（10×）、浓缩造成洗衣液（20×）摇匀成操作液(水蒸气去阳离子水或去阳离子水稀释液)

• 在B0孔中放入50µl0.0 ng/ ml基准品水溶液

• 在各标淮孔内加入50µl的规范标准品饱和溶液

• 在各种品孔里加入50µl试样盐溶液

• 在全部孔内加入50µl的抗黄曲霉素（AF）抗原酶根据物

• 用适当的力度轻轻晃荡反馈板几秒。

9.3 37℃温浴30min （温浴进程中不断轻拍现象板，可能增多双孔不确定度）

9.3.1 甩掉孔中全自动，用洗液洗洁微孔板板5次，zui后一次性应在吸水性从纸击打以*洗除孔中粘液。

2

9.4 不起作用

• 干洗程序代码提交后，请马上用微量分析移液器在每次砂芯过滤器中先加盟50µl显色液A，多加 50µl显色液B；较轻乱晃反响板使之*混匀

• 37℃温浴10min

• 每孔内加入50µl解除液，混匀

• 在450nm下检则吸光度，数据在5min内导入。

10 最终折算

10.1降钙素原检测剖析

10.1.1所赚取的各个含量准则饱和溶液和模本吸光度值的平均的值（B）除了*个准则（0标）的吸光度值（B0）再×100%，即百分吸光度值。

B—标稀硫酸或样板稀硫酸的月均吸光度值B0—0µg/L规格氢氧化钠溶液的平衡吸光度值

10.1.2以黄曲霉素（AF）浓度值的对数计算指标值X轴，百分吸光度临界值Y轴，绘制图的标准曲线美图。按照其打样定制百分吸光度值，可从曲线美上收获使用点的横座标，成为黄曲霉素（AF）盐浓度的对数计算值，求得发对数计算成为判断液中黄曲霉素（AF）质量浓度C（ng/ml）10.1.3致使图纸通过了事前扑灭，所以说依据标淮的曲线所获资金出的图纸质量浓度必要要再乘上其扑灭

3的倍数。

10.2 半化学发光法校正

10.1.1估计半定量分析旋光度的测定：应当使用一些相应的标液与土样同进行，按照其土样与标品吸光

度值的深浅相对，选择样机有机废气浓度值是乘以是不是少于规定值。

10.1.2医疗仪器半按量测得：首选采用一款尽可能的条件的液与样本同正常运作，通过样本与条件的品颜色搭配

薄厚比，答案合格品渗透压值是值为依旧超出规定值。

11 活性聊天

类物质 相互想法

黄曲霉素B1 100% 黄曲霉素B2 80% 黄曲霉素G1 75% 黄曲霉素G2 30%

12 化学试剂盒参数指标

本采血管盒测量极限值为0.1ppb B0吸光度*值应不低于1.0

微生物培养基盒吸光度板内测量误差不大于8％，板间偏差需小于15％。用本使用说明书怎么写书展示 的策划 范例导入的办法收集率不小于80％。

13 规则弧度经济模式（仅限参考价值）

试 剂 盒 提 供 的 标 准 曲 线 范 围 为 0.1ng/ml~8.1ng/ml 。

3

14 剖析限止

本微生物培养基盒监测为抗体阳性的土样可以用另种策略如HPLC或GC/MS用以确证。

黄曲霉素（AF）酶联免疫力分析一下（ELISA）

化学制剂盒施用说书

本免疫试剂盒只供探析用到。

1 在使用的目的：

本生化试剂盒用做加测饲料添加剂和五谷杂粮中黄曲霉素（AF）成分。

2 实验所关键技术

本生化试剂盒分为真接争夺 ELISA 策略，在微孔板板包被有黄曲霉素（AF）偶联抗原，引入黄曲霉素（AF）要求品或样品管理，自由黄曲霉素（AF）与微孔过滤条上预包被的黄曲霉素偶联抗原相互完善之间的竞争抗黄曲霉素（AF）抗体阳性酶标注物，用 TMB 底物显色，建立终结液后颜色图片由深蓝色转成紫色，用酶标仪在 450nm 激发光谱下做好测量，吸光值与检样中黄曲霉素（AF）含氧量成正比，能够规范的曲线估算打样定制中黄曲霉素（AF）的含量。

3 生化试剂盒组成部分

• 预包被的黄曲霉素（AF）偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12 孔×4 条）。

• 黄曲霉素（AF）规定品：6 瓶（1ml/瓶），硫含量区分是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。

• 抗 AF 抵抗能力酶紧密联系物：1 瓶（3ml）。

• 显色液 A：1 瓶（3ml）。

• 显色液 B：1 瓶（3ml）。

• 中止液：1 瓶（3ml），2M 氢氧化钠。

• 子样本调制液：1 瓶（10×,   3ml），于样品英文希释用。

• 高浓洗涤剂液：1 瓶（20×，20ml），使用在洗板。

• 阐明书这份。

• 需用而未展示 的建材

4.1 生产设备

4.1.1主波长450nm酶标仪。4.1.2破碎机图片机。4.1.3量筒。4.1.4自激振荡器。4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相当于的滤膜。

4.1.7氢化物发生器移液器。

4.2 制剂

4.2.1去铝离子水或蒸溜水。

4.2.2 甲醇。

• 储藏

• 制剂盒储存于2~8℃，切忌冷冻冰箱

• 未用完的纳米纤维板可以良好的密封性吹干保留

6 目光方式方法

• 选用制剂盒前请仔细地浏览解释书。

• 不必使用的失效免疫试剂盒。

1

• 化学制剂盒的使用前，将化学制剂完全恢复至室内温度（25±2℃），推荐 最起码回温2个钟头。

• 规格品中包含的黄曲霉素（AF），选择应当特别的准备，操作步骤应当带劳保手套。

• 中断液中内含氢氧化钾，利用时处理烧灼白色皮肤及生锈衣服。

• 区别标准的品、样板用什吸头没法混用，除非会决定实验室检测成果。

• 各种批号科学实验化学药品盒中的科学实验化学药品不许不混用；各种规范标准品、样件所用到的吸头不许不混用，不能会决定科学实验毕竟。
• 做好溶解工作模本时需要用本制剂盒中的模本做好溶解工作液，因为会印象实验报告结局

• 结合化学制剂应当防范起泡。

7 作业液筹备

7.1黄曲霉素（AF）基准品盐溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

• 高浓洗衣机清洗液：用水蒸气纯净水按1:20(1+19)稀释溶解紧急

• 范本直接稀释就可以液：用水蒸气纯水按1:10(1+9)调制备品

• 显色剂：已备用电源，杜绝光源线直照

• 反映中断液：已预备

8 原材料处里软件程序（检样在截取阶段中，要坚持原则按维修手册书工作，截取阶段中应较准调制，以至于

会发生最后不精确度，印刷品还应留存文档在阴凉处背光优点及食品冷藏留存文档）

8.1取10g绞碎的试品，加 20ml 70%甲醇稀硫酸

8.2强大震荡3分种

8.3用Whatman 滤膜过滤程序

8.4取25µl加工后的合格品，入驻25µl模板掺水液于发应孔中（模板掺水度数为2）

9 酶免讲解工作步骤

9.1 测试流程

• 试验进行前请将其他实验试剂于盒外多方面找回至常温（25±2℃），时候约2小的时候。回温至恒温（25±2℃）后再去除纳米纤维过滤条，过多的的纳米纤维过滤条重密封胶之后于2~8℃低温干燥包存注：必定切实保障回温积极，以免作用测试的度和精确度度。
• 的使用后请立将要制剂放回2~8℃保管

• 请也不要提升探讨编译程序

• 请使用的的进样器移液器

• 实际操作仍然刚刚开始，请无需终止其他环节

• ELISA然而的可连续性更大程度较的考量于实操过程，请严苛确定规定实操

• 为制止重叠的污染，每位条件品和仿品均要把用的不同的吸头加样

• 加样时提示语让吸头接触性微孔过滤中的悬浊液或内表面上

9.2 数据分析步聚

• 及时实现识别码，标签B0、准则品和印刷品的职位，介绍开始双孔检则

• 取所须人数的细孔板（细孔板条可拆），将已有板条直接封闭并请马上放回2~8℃另存

• 试样直接稀释就可以液（10×）、浓缩咖啡洗條液（20×）调制成作业液(萃取水或去阴离子水扑灭)

• 在B0孔中放入50µl0.0 ng/ ml细则品硫酸铜溶液

• 在各标准化孔里加入50µl的细则品稀硫酸

• 在各色各样品孔里添加入50µl检样盐溶液

• 在各种孔里加入50µl的抗黄曲霉素（AF）抗体阳性酶综合物

• 慢慢的幌动反應板几几秒钟。

9.3 37℃温浴30min （温浴环节中隔三差五轻拍作用板，可不可以限制双孔随机误差）

9.3.1 甩掉孔中粘液，用洗液洗滌细孔板5次，zui后次应在吸水性白纸拍击以*除掉孔中流体。

2

9.4 发应

• 洗衣小程序来完成后，会用微量分析移液器在每一微小孔中先添加50µl显色液A，另加 50µl显色液B；不严重颤动不良反应板使之*混匀

• 37℃温浴10min

• 每孔添加入50µl终结液，混匀

• 在450nm下查测吸光度，数据在5min内加载。

10 后果统计

10.1一定量定性分析

10.1.1所得到的每次浓硫酸浓度标准氢氧化钠溶液和样品吸光度值的人平均数（B）除*个规范（0标）的吸光度值（B0）再乖以100%，即百分吸光度值。

B—标准化硫酸铜溶剂或样表硫酸铜溶剂的平均水平吸光度值B0—0µg/L规范硫酸铜溶液的平均值吸光度值

10.1.2以黄曲霉素（AF）密度的常用对数参考值X轴，百分吸光度数值为Y轴，作图标拟合数据图表。基于样机百分吸光度值，可从拟合曲网上营销的相关联点的横作标，就是黄曲霉素（AF）浓硫酸浓度的对数计算值，求得违抗数计算当以校正液中黄曲霉素（AF）含量C（ng/ml）10.1.3鉴于图纸由了首先需要溶解，但是不同标准规定斜率获得的出的图纸溶度必定要再乘上其溶解

因数。

10.2 半酶联免疫法测定法

10.1.1辨认半酶联免疫法判断：前提选择同一个合适的条件液与样本同程序运行，据样本与条件品吸光

度值的快慢比效，断定原辅料氧化还原电位值是超过还大过标准单位值。

10.1.2分析仪器半降钙素原检测分析：应先采用一种尽量的基准液与样机同运动，跟据样机与基准品配色

薄厚比，来判断样件含量值是超过都是不小于规则值。

11 特女性朋友

产品 是交叉症状

黄曲霉素B1 100% 黄曲霉素B2 80% 黄曲霉素G1 75% 黄曲霉素G2 30%

12 化学药品盒基本参数

本化学试剂盒检查最高值为0.1ppb B0吸光度*值应多于1.0

生化试剂盒吸光度板内测量误差值为8％，板间计算误差需小于15％。用本阐述书作为的公司样本量分离出来方式回收分类处理率多于80％。

13 标准斜率形式 （仅作参阅）

试 剂 盒 提 供 的 标 准 曲 线 范 围 为 0.1ng/ml~8.1ng/ml 。

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14 讲解限制

本采血管盒测试为弱阳的试品需要用其它种措施如HPLC或GC/MS多加确证。