免疫组化实验的要点和技巧

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就免役组化实验性的注意点和的技巧有哪此给大众供应几个小编建议

1．调整：用4%的多聚装修甲醛和苯紧固液。针对冻成切开，装修甲醛和苯紧固偶时不时比冻成甲苯好；但针对不一样的组和抗原，可以选择用不一样的紧固液。偶时不之时 商品销售化的抵抗能力有相对比较最合适而引荐的紧固液，请于购买前留意就使用指南。Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。

2．组建甩干，白色：期限不能够内容过长，不然就在切开时最易杂物，切不全版。

3．切开时展片：有些人组织开展在切开后根本无法在硫酸铜溶液刺激性，在这时可正确地在硫酸铜溶液融入少量无水乙醇。

4．烤片：60℃ 30分钟或37℃ 过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。

5．蜡块及切片的保存：在4℃保存

6．脱片问题： Poly-L-Lysine（多聚赖氨酸）为目前免疫组化染色工作中zui常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1：50丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。

7．灭活内源性酶：HRP系统：3%双氧水灭活；AP系统：3%HAc灭活。

8．暴露抗原：对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度（不同抗体的*修复液参阅抗体说明书）。对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。

9．封密：在小羊血清封密，非特女性朋友染色法仍强大时，能延长耗时封密耗时或用萃取血清封密

10．抗体稀释：应遵循“现用现配”的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。

11．背景高：在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特别是在显色之前要多洗。

12．返蓝：在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如PBS）或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。

13．显色：千万要在体视显微镜下了解，提前准备把握后台。

14．在整个操作过程中，切片千万不能干燥，否则会有非特异性染色。

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