人1,25-二羟基维生素D3（1,25（OH）2D3）定量检测试剂盒（ELISA）

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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人1,25-二羟基各种维生素D3（1,25（OH）2D3）定量分析判断化学药品盒（ELISA）

用说书

【试剂盒名称】

人1,25-二羟基维他命D3（1,25（OH）2D3）酶联免疫法测试化学试剂盒（ELISA）

【试剂盒贷款用途】

降钙素原检则检则人血清、血浆及相关内容粘液样本量中1,25-二羟基维CD3（1,25（OH）2D3）的含量。

【检测的工作原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人1,25-二羟基维CD3（1,25（OH）2D3）单克隆免疫抗体黑色酶标包被板中，温育大量时期后，洗衣去除未紧密结合的组成成分，多加入酶标事业液，温育充足時间后，清洗消去未搭配的组成成分。分别加入到底物A、B，底物（TMB）在辣根过阳极铁的氧化物酶（HRP）离子液体下和转化了为蓝绿色货物，在酸的角色下变身呈黄色，色彩的深度与样机中人1,25-二羟基胡萝卜素D3（1,25（OH）2D3）溶度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人1,25-二羟基维D3（1,25（OH）2D3）含量。

【试剂盒组建】

微信备注名：标品（1号→6号）氨水浓度逐一为：100、50、25、12.5、6.25、3.125 pg/mL.

【需而未出示的免疫试剂和室内健身器材】

1、37℃衡温箱

2、规则型号酶标仪

3、细密移液器及一起性吸头

4、水蒸气纯净水

5、做次性试管

6、容易吸水纸

【操作步骤】

1、安排：从冰箱保鲜拿掉化学试剂盒，在常温复温平衡点30一分钟。

2、配液：用分馏水将20倍浓缩液洗洁液做好稀释工作成原倍的洗洁液。

3、加规定品和待测范例：取足够了数目的酶标包被板，特定于架构上，分离安装条件品孔、待测样本量孔和留白对比孔，记录表各孔地方，在条件品孔里添加入条件品50μL；待测子子样本孔中先放入待测子子样本10μL，另加模本稀释溶解液40μL（即范本就稀释5倍）；一片空白差表孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去全自动，吸湿纸中拍干，每孔写满洗涤剂液，静置1min，甩去洗涤剂液，吸湿白纸拍干，这么抄袭洗板4次（也能用的 洗板机按维修手册怎么写书操作步骤洗板）。

6、加酶标业务液：每孔进入酶标业务液50μL，一片空白比较孔没有。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去溶液，吸潮紙上拍干，每孔油满洗條液，静置1min，甩去干洗液，容易吸水一张纸拍干，这么按顺序洗板4次（也都可以洗板机按情况使用说明书控制洗板）。

9、显色：每孔先参加显色剂A 液50μL，再加上入显色剂B液 50μL，平板等混匀器混匀30s（或用手掌悄悄的振动混匀30s），37℃避光显色15min。

10、停止：拆下酶标板，每孔加中止液50μL，暂停发生反应（的颜色由天蓝色立转淡黄色）。

11、测量：以空页孔调零，在暂停后1530分钟内，用450nm激发光谱自动测量各孔的吸光值（OD值）。

12、算出：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【模板标准】

1、样表不能含叠氮钠（NaN₃），由于叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、动物标本爬取后更快地做好提现，提现按相应的期刊论文做好，提现后应负快做好实验英文。若并不能会试验检测，可将组织切片放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、检测所严格的决定就产品说明书的操作步骤实行，检测所結果认定须得以酶标仪读数是以。

2、酶标包被板打开后如未用完，应及时放入密封隔绝袋添加变干剂永久保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、一定要记住子样本早就稀释液5倍，计算出最后相乘5不是样品事实上氧浓度。

5、本免疫试剂盒一定量范畴为3.125-100pg/mL，多于此依据，为标准规定的身材曲线廷伸算获得的，不当作合理性一定量毕竟，请说出专项 调制液调制后检测合理性毕竟（3.125-100pg/mL区间内），相乘总溶解4的倍数即是范例zui终氧化还原电位。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为以免 相交被污染，标准化品、样例和空白处比每加一位就得根换两次吸头；酶标本职工作液、子样本做好稀释工作液和底物等公众酚类化合物，要悬臂加样，不能有遇到砂芯过滤器；不宜多次选择封板膜。

8、化学药品盒保存期期内采用，各个批号的化学药品没法混用。

9、底物B对光特别敏感，尽量不要长用时泄露于光下。

【操作程序总结】

提前准备化学制剂，试品和标淮品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检则比率】

3.125pg/mL - 100pg/mL

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月