鱼类胰岛素生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）定量检测试剂盒（ELISA）

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 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

鱼儿胰岛素植物生长细胞因子紧密联系蛋清-1（IGFBP-1）一定量验测生化试剂盒（ELISA）

动用使用方法书

【试剂盒名称】

海洋鱼类胰岛素萌发系数综合蛋白质-1（IGFBP-1）定量分析查重免疫试剂盒（ELISA）

【试剂盒的用途】

一定量查重鱼血清、血浆及一些介质模板中类胰岛素生长发育要素切合淀粉酶-1（IGFBP-1）的含量。

【检测的原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被鱼种胰岛素出现细胞运用蛋白质-1（IGFBP-1）单克隆抵抗能力透明体酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加上入酶标办公液，温育充足的时后，洗涤剂弄掉未根据的成份。逐个加如底物A、B，底物（TMB）在辣根过硫化物酶（HRP）崔化下流量转化为橙色货物，在酸的用途下变身茶色，颜色的深浅与样品中鱼儿胰岛素种植系数搭配核蛋白-1（IGFBP-1）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中淡水鱼胰岛素发展细胞相结合蛋清-1（IGFBP-1）含量。

【试剂盒组合而成】

微信备注名：标准化品（1号→6号）溶度顺次为：80、40、20、10、5、2.5 μg/L.

【要而未给予的微生物培养基和用具】

1、37℃恒溫箱

2、条件品种酶标仪

3、高精度移液器及一天性吸头

4、分馏水

5、次性试管

6、吸附纸

【操作步骤】

1、打算：从电冰柜拿出免疫试剂盒，恒温复温稳定平衡30分鐘。

2、配液：用水蒸气生理盐水将20倍精浓洗洁液扑灭成原倍的洗洁液。

3、加标品和待测模本：取一定总数量的酶标包被板，比较固定于整体布局完成后上，不同设计规范的要求品孔、待测样版孔和空白图片比孔，登记各孔方位，在规范的要求品孔添加入规范的要求品50μL；待测样版孔中先添加待测样版10μL，再加上样例就稀释液40μL（即子样本就稀释5倍）；白页比对孔不添加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液态物质，储水书本上拍干，每孔满油洗衣机清洗液，静置1min，甩去干洗液，吸水能力纸中拍干，那么多个洗板4次（也需用洗板机按规格书书进行洗板）。

6、加酶标的任务液：每孔成为酶标的任务液50μL，空缺对比孔不放。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去固体，吸水性纸里拍干，每孔点满洗洁液，静置1min，甩去干洗液，吸水性纸里拍干，都是这样重新洗板4次（也该用洗板机按证明书进行洗板）。

9、显色：每孔先放入显色剂A 液50μL，加上入显色剂B液 50μL，iPad混匀器混匀30s（或手去缓缓振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、停止：掏出酶标板，每孔加中断液50μL，终结发应（的颜色由黑色立转黑色）。

11、法测定：以空白图片孔调零，在解除后15分钟的英文内，用450nm激发光谱衡量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算出：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样表规定】

1、样例不能含叠氮钠（NaN₃），而是叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本搜集搜集后提早确定导入，导入按涉及参考文献确定，导入后应要快确定调查。若不许完毕可靠性试验，可将动物标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、试验性严格要求以解释书的的操作做出，试验性可是分辨须得以酶标仪读数为标准。

2、酶标包被板开封市后如未用完，应随时放入填料密封袋里加干躁剂保持。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、不忘初心样板早已经就稀释5倍，换算可是乘于5才应该是样板现实有机废气浓度。

5、本免疫试剂盒参考值超范围为2.5-80μg/L，高于此范围图，为的标准曲线美廷伸核算应纳税所得额，不算作为准降钙素原检测报告单，请使用非常规调制液调制后分析为准报告单（2.5-80μg/L依据内），乘上总稀释液公倍数成为范本zui终酸度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为以防交叉重合污染问题，标准规范品、子样本和白页剖析每加另一个要换1次吸头；酶标事业液、样本量希释液和底物等共公多组分，要悬臂加样，不可触碰到微小孔；应当反复重复利用封板膜。

8、化学制剂盒保存期期内适用，不一样批号的化学制剂允许混用。

9、底物B对光强烈，以免长周期体现于光下。

【操作程序总结】

工作制剂，样品管理和标淮品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检查时间范围】

2.5μg/L - 80μg/L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月