牛活性维生素D3（VD3）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

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 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

牛灵活性胡萝卜素D3（VD3）参考值检测工具采血管盒（ELISA）

施用原因分析书

【化学试剂盒标题】

牛几丁质酶维D3（VD3）按量检侧采血管盒（ELISA）

【试剂盒用处】

化学发光法监测牛血清、血浆及相关夜体模本中可溶性各种维生素D3（VD3）的含量的。

【检测远离】

本化学试剂盒分为双抗原三步夹心酶联免役活性炭吸附法（ELISA）。将规范标准品、待测样板加进到事先包被牛催化活性维生素cD3（VD3）单克隆抵抗能力透明体酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，后加入酶标工作上液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过被氮化合物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的的作用下成了成黄色，颜色的深浅与样品中牛生物复合维生素D3（VD3）浓度呈正相应的，450nm光波长下测量OD值，选择准则品和打样定制的OD值，计算方法模本中牛可溶性维他命D3（VD3）分子量。

【试剂盒形成】

自己的名字：的标准品（1号→6号）浓度值分别为：800、400、200、100、50、25 μg/L.

【需用而未作为的生化试剂和材料】

1、37℃恒溫箱

2、条件样式酶标仪

3、精密加工移液器及单次性吸头

4、水蒸气纯水

5、一些性试管

6、吸水能力纸

【操作步骤】

1、备考：从冰箱冷藏拿掉化学药品盒，高温复温平稳3020分钟。

2、配液：用减压纯净水将20倍精炼洗衣液兑水成原倍的洗衣液。

3、加标准的品和待测样品：取够了总量的酶标包被板，一定于前端框架上，分别为软件设置规格化品孔、待测样板孔和一片空白参考孔，信息各孔地理位置，在规格化品孔添加入规格化品50μL；待测范本孔中先加盟待测范本10μL，后加样本量溶解液40μL（即范本溶解稀释5倍）；一片空白差表孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液态，储水从纸拍干，每孔加够洗涤剂液，静置1min，甩去洗衣液，吸附从纸拍干，那么重覆洗板4次（也快速可用洗板机按说明怎么写书基本操作洗板）。

6、加酶标任务液：每孔加盟酶标任务液50μL，乱码比对孔不用。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去溶剂，吸潮从纸拍干，每孔完成洗條液，静置1min，甩去干洗液，吸附紙上拍干，这么去重复洗板4次（也该用洗板机按解释书实操洗板）。

9、显色：每孔先加如显色剂A 液50μL，加个入显色剂B液 50μL，小米平板电脑混匀器混匀30s（或手去悄悄地振动混匀30s），37℃避光显色15min。

10、中断：导出来酶标板，每孔加中断液50μL，中止体现（色泽由红色立转金色）。

11、测得：以空缺孔调零，在终结后15秒钟内，用450nm光谱在线测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算的：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样版必须】

1、范本不能含叠氮钠（NaN₃），为了叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、动物标本搜集后更好地来转化成，转化成按相关内容医学文献来，转化成后应要快来进行实验。若不允许完毕疲劳试验，可将疟原虫放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、研究报告要从严遵照使用说明书书的做操作做，研究报告效果辨别不得不以酶标仪读数为标准。

2、酶标包被板打开后后如未用完，应实时装进去密闭袋里加干燥处理剂保护。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、谨记范例己经希释5倍，来计算效果乘于5做到样板实际上的酸度。

5、本实验试剂盒按量範圍为25-800μg/L，超过了此比率，为细则曲线图连通算起所得额，不成为较准的化学发光法可是，那可以用特种直接做好稀释工作就可以液直接做好稀释工作就可以后检测较准的可是（25-800μg/L的范围内），乘于总配制倍率成为样板zui终酸度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为制止穿插污染破坏，规范标准品、样板和空缺比每加同一个必须换一天吸头；酶标上班液、范本做好稀释工作液和底物等共公多组分，要悬臂加样，不准遇到微孔过滤；不得已相似食用封板膜。

8、生化化学试剂盒有效期期内选择，其他批号的生化化学试剂没法混用。

9、底物B对光特别敏感，以免 长时候爆出于光下。

【操作程序总结】

注意生化试剂，打样定制和标准规定品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查重领域】

25μg/L- 800μg/L

【规格】

48人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月