人1,25-二羟基维生素D3（1,25（OH）2D3）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人1,25-二羟基维他命D3（1,25（OH）2D3）参考值测量化学试剂盒（ELISA）

应用这维修手册

【试剂盒名称】

人1,25-二羟基维D3（1,25（OH）2D3）定量分析加测生化试剂盒（ELISA）

【试剂盒的主要用途是什么】

化学发光法检查测量人血清、血浆及涉及粘液模本中1,25-二羟基维CD3（1,25（OH）2D3）的含量。

【检测原里】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人1,25-二羟基胡萝卜素D3（1,25（OH）2D3）单克隆抗体阳性半透酶标包被板中，温育大量时间段后，洗洁除了未整合的物质，另加入酶标事情液，温育可以时期后，洗條抛开未组合的含量。按顺序参加底物A、B，底物（TMB）在辣根过空气铁的氧化物酶（HRP）催化剂的作用下转为为颜色乙酰乙酸，在酸的效应下转换成黄，茶汤颜色的薄厚与土样中人1,25-二羟基维他命D3（1,25（OH）2D3）有机废气浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人1,25-二羟基维D3（1,25（OH）2D3）含量。

【试剂盒分为】

微信备注名：细则品（1号→6号）氧浓度按序为：100、50、25、12.5、6.25、3.125 pg/mL.

【要求而未保证的化学试剂和电子元器件】

1、37℃恒温性比较好箱

2、规定规格为酶标仪

3、精密机械移液器及第二次吸头

4、减压纯净水

5、次性试管

6、吸附纸

【操作步骤】

1、需要准备：从保鲜柜拿出化学制剂盒，常温复温稳定30钟头。

2、配液：用分馏水将20倍沉淀洗洁液希释成原倍的洗洁液。

3、加细则品和待测范例：取满足人数的酶标包被板，稳固于框架结构上，主要使用规则化品孔、待测样板孔和留白對照孔，信息各孔地方，在规则化品孔里加入规则化品50μL；待测子子样本孔中先进入待测子子样本10μL，多加样表稀释溶解液40μL（即子样本掺水5倍）；空白一片比较孔不带。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去粘液，吸潮书本上拍干，每孔加完清洗液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，吸水能力从纸拍干，如此这般重新洗板4次（也能作洗板机按就使用说明书运作洗板）。

6、加酶标业务液：每孔加如酶标业务液50μL，空白页较孔要加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去流体，吸水性A4纸拍干，每孔加完清洗液，静置1min，甩去洗條液，储水白纸拍干，这样从复洗板4次（也可以选择洗板机按就规格书操作流程洗板）。

9、显色：每孔先进入显色剂A 液50μL，另加入显色剂B液 50μL，华为平板电脑混匀器混匀30s（或拿手轻抚之间上下混匀30s），37℃避光显色15min。

10、暂停：掏出酶标板，每孔加撤消液50μL，结束症状（有颜色由蓝绿色立转米黄色）。

11、测得：以空白的孔调零，在中止后15几分钟内，用450nm光波长测量方法各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【范例追求】

1、模本不能含叠氮钠（NaN₃），因此叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、样本采摘后早日确定截取，截取按涉及到专著确定，截取后肩负着快确定实验所。若没办法可以实验室检测，可将组织切片放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、测试严格要求采用就使用说明的实际操作参与，测试结局界定须要以酶标仪读数为标准。

2、酶标包被板河南开封后如未用完，应即时装进去密封垫袋中放空气干燥剂存为。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、不忘初心模本现已就稀释5倍，确定没想到相乘5才可以样板真正密度。

5、本制剂盒按量面积为3.125-100pg/mL，多于此使用范围，为基准弧度延长算起所得到，不当作最准无误降钙素原检测結果，那可以用特俗溶解兑水液溶解兑水后法测最准无误結果（3.125-100pg/mL空间内），乖以总扑灭度数即是样表zui终浓硫酸浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免出现交叠环境破坏，规范品、样版和空白图片差表每加同一个就得更改一场吸头；酶标工作上液、样例配制液和底物等公用多组分，要悬臂加样，不宜遇上细孔；不许重覆动用封板膜。

8、化学生化试剂盒存放期内动用，的不同批号的化学生化试剂不恰混用。

9、底物B对光过敏，防止出现长期限爆漏于光下。

【操作程序总结】

需要准备实验试剂，供试品和规范品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检则范畴】

3.125pg/mL - 100pg/mL

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月