犬肿瘤坏死因子α（TNF-α）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

犬肿癌死亡分子α（TNF-α）定量分析监测化学试剂盒（ELISA）

的使用阐明书

【生化试剂盒种类】

犬恶性肿瘤萎缩指数α（TNF-α）一定量在线检测化学药品盒（ELISA）

【试剂盒应用领域】

一定量检侧犬血清、血浆及涉及到的固态样板中肿癌死亡细胞因子α（TNF-α）的浓度。

【检测原理图】

本实验试剂盒采用了双免疫抗体抗体第二步夹心酶联免疫抗体活性炭吸附法（ELISA）。将规范品、待测样版添加到提前包被犬癌症挫裂分子α（TNF-α）单克隆抗原半透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，加个入酶标事业液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过阳极氧化物质酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的反应下转变成黄白色，颜色的深浅与样品中犬肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度呈正重要性，450nm光波波长下检验OD值，表明基准品和产品的样品的OD值，来计算范本中犬癌肿挫裂要素α（TNF-α）纯度。

【试剂盒组合而成】

自己的名字：标准规范品（1号→6号）有机废气浓度分别为：80、40、20、10、5、2.5ng/L.

【要而未给予的生化试剂和用品】

1、37℃衡温箱

2、标准的年纪酶标仪

3、精密机械移液器及有期限吸头

4、萃取水

5、连续性试管

6、储水纸

【操作步骤】

1、备好：从冷库导出来实验试剂盒，制冷复温取舍30钟头。

2、配液：用萃取水将20倍浓缩液洗衣机清洗液就稀释成原倍的洗衣机清洗液。

3、加标准品和待测样例：取一定数目的酶标包被板，固定住于三层架构上，各如何设置规定单位品孔、待测范例孔和空白页剖析孔，日志各孔区域，在规定单位品孔添加入规定单位品50μL；待测样板孔中先倒入待测样板10μL，后加模板配制液40μL（即样表稀释溶解5倍）；乱码相较比较孔不添加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去固体，吸水性紙上拍干，每孔加够清洗液，静置1min，甩去洗衣液，吸湿A4纸拍干，那么反复重复洗板4次（也可以选择洗板机按说明怎么写书的操作洗板）。

6、加酶标运作液：每孔倒入酶标运作液50μL，空白处比较孔不加以。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去透明液体，容易吸水A4纸拍干，每孔加够洗條液，静置1min，甩去洗涤剂液，吸湿一张纸拍干，既然如此重复使用洗板4次（也能用的 洗板机按表示书操作方法洗板）。

9、显色：每孔先融入显色剂A 液50μL，加个入显色剂B液 50μL，uv混匀器混匀30s（或手去悄悄股票震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、结束：拿出来酶标板，每孔加中断液50μL，终结影响（背景颜色由绿色立转黄）。

11、判断：以空白一片孔调零，在撤消后15分钟左右内，用450nm可见光波长在线测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算方式：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样版规范要求】

1、样表不能含叠氮钠（NaN₃），所以叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、疟原虫爬取后更好地做转化成，转化成按涉及到的学术论文做，转化成后肩负着快做实验操作。若不许即刻测试，可将动物标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、研究严要求遵照反映书的方法去，研究结杲界定务必以酶标仪读数准确。

2、酶标包被板打开后如未用完，应及时安装密封袋中放干燥处理剂保管。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、不忘初心范例都已经 做好稀释工作5倍，计算报告相乘5才可以模本事实上盐浓度。

5、本化学试剂盒降钙素原检测范畴为2.5-80ng/L，小于此依据，为准则曲线方程廷伸估算所获资金，不当作精确一定量报告，那可以用特异溶解液溶解后核查精确报告（2.5-80ng/L依据内），乖以总兑水质数和合数就是样表zui终氧浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为以防是交叉环保问题，标准的品、模板和空白页剖析每加同一个也要进行更换一天吸头；酶标工作任务液、子样本做好稀释工作液和底物等服务性混合物，要悬臂加样，不应触碰到纳米纤维；不准再次的使用封板膜。

8、微生物培养基盒保鲜期内用，各个批号的微生物培养基没法混用。

9、底物B对光特别敏感，尽量避免长日子体现于光下。

【操作程序总结】

筹备微生物培养基，样板和标淮品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【测试范畴】

2.5ng/L - 80ng/L

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月