犬肿瘤标志物（DR70）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

犬肺部肿瘤标识物（DR70）酶联免疫法检验生化试剂盒（ELISA）

运用讲解书

【实验试剂盒命名】

犬良性肿瘤标志图案物（DR70）参考值检查采血管盒（ELISA）

【试剂盒功用】

一定量检则犬血清、血浆及关于液态物质样板中肺部肿瘤符号物（DR70）的纯度。

【检测原理图】

本微生物培养基盒主要采用双免疫系统抗体第二步夹心酶联免疫系统吸附剂法（ELISA）。将细则品、待测样品入驻到即时包被犬癌肿标签物（DR70）单克隆抵抗能力透明的酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，后加入酶标业务液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过防非金属氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的效果下成了呈黄色，颜色的深浅与样品中犬肿瘤标志物（DR70）浓度呈正有关，450nm激发光谱下核查OD值，结合细则品和样品英文的OD值，统计范本中犬良性肿瘤象征物（DR70）含水量。

【试剂盒组成了】

备注栏：准则品（1号→6号）有机废气浓度循序为：8、4、2、1、0.5、0.25 mg/L

【需而未展示的化学药品和用具】

1、37℃恒温恒湿箱

2、标淮技术参数酶标仪

3、高精密移液器及一回性吸头

4、水蒸气蒸溜水

5、第一下子试管

6、吸水能力纸

【操作步骤】

1、预备：从冷库拿出来化学药品盒，制冷复温发展30半个小时。

2、配液：用水蒸气去离子水将20倍溶缩洗衣液扑灭成原倍的洗衣液。

3、加基准品和待测样例：取十分总数量的酶标包被板，一定于方框上，分离設置规范品孔、待测子样本孔和空白处较孔，统计各孔部位，在规范品孔添加入规范品50μL；待测样表孔中先成为待测样表10μL，加上范本溶解液40μL（即样品配制5倍）；乱码较孔不带。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去溶剂，容易吸水一张纸拍干，每孔加完洗洁液，静置1min，甩去洗衣液，吸潮纸中拍干，远比去重复洗板4次（也常用洗板机按讲解书控制洗板）。

6、加酶标上班液：每孔申请加入酶标上班液50μL，空白的较孔要加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去气体，吸水性纸中拍干，每孔加完洗洁液，静置1min，甩去洗衣液，储水紙上拍干，这样相似洗板4次（也可作洗板机按使用说明书怎么写书操作的洗板）。

9、显色：每孔先倒入显色剂A 液50μL，多加入显色剂B液 50μL，小米平板电脑混匀器混匀30s（或拿手慢慢振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、中止：拆下酶标板，每孔加撤消液50μL，中止作用（颜色图片由黄色的立转黄色的）。

11、法测：以空白一片孔调零，在中断后15半个小时内，用450nm可见光波长估测各孔的吸光值（OD值）。

12、计算出来：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【模本标准要求】

1、样版不能含叠氮钠（NaN₃），是因为叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、样本获取后更好地参与导出，导出按各种相关论文参考文献参与，导出后肩负着快参与进行实验。若不可随时现场实验，可将动物标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、科学科学实验要严格如果根据情况规格书的操作使用实行，科学科学实验没想到区分须得以酶标仪读数来算。

2、酶标包被板濮阳后如未用完，应立马放进密封性袋里加缺水剂保持。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、不忘初心样例已然希释5倍，计算方法结杲相乘5才模板预期氧浓度。

5、本化学制剂盒参考值规模为0.25-8mg/L，超出此位置，为标淮线性连通计算公式得出，不当作最准参考值可是，请说出唯一性扑灭液扑灭后分析最准可是（0.25-8mg/L条件内），乖以总兑水陪数其为样例zui终含量。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为防范交叉性污染问题，条件品、样品和一片空白较每加一就是进行更换一些吸头；酶标的工作液、样品做好稀释工作液和底物等公众酚类化合物，要悬臂加样，不了遇见纳米纤维；不得已抄袭采用封板膜。

8、免疫化学试剂盒存放期内的使用，各种不同批号的免疫化学试剂不可混用。

9、底物B对光强烈，不要长事件爆漏于光下。

【操作程序总结】

筹备 化学制剂，打样定制和的标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查测的范围】

0.25mg/L - 8mg/L

【规格】

48T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月