犬细胞角蛋白21-1片段（CYFRA21-1）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

犬内部角蛋白酶21-1段落（CYFRA21-1）参考值检查实验试剂盒（ELISA）

适用代表书

【实验试剂盒名字】

犬受损细胞角蛋清21-1精彩片段（CYFRA21-1）一定量加测生化试剂盒（ELISA）

【试剂盒用处】

参考值加测犬血清、血浆及有关介质子样本中細胞角蛋白酶21-1电影片段（CYFRA21-1）的含铁。

【检测原则】

本生化试剂盒运用双抗原两步来完成夹心酶联免疫细胞树脂吸附法（ELISA）。将标准规范品、待测样品建立到事先包被犬体细胞角核蛋白21-1场面描写（CYFRA21-1）单克隆抵抗能力透明度酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，后加入酶标岗位液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过腐蚀物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的意义下改成紫色，颜色的深浅与样品中犬细胞角蛋白21-1场面描写（CYFRA21-1）浓度呈正涉及，450nm光波长下法测OD值，只能根据标准品和土样的OD值，折算模本中犬神经元角蛋白质21-1情节（CYFRA21-1）分量。

【试剂盒构造】

备注名称：细则品（1号→6号）密度顺次为：8、4、2、1、0.5、0.25 μg/L.

【须得而未提高的实验试剂和电子元器件】

1、37℃恒温恒湿箱

2、标规格参数酶标仪

3、精细移液器及做次性吸头

4、减压纯净水

5、一下性试管

6、吸附纸

【操作步骤】

1、打算：从家用冰箱卸下来免疫试剂盒，室内温度复温均衡性3030分钟。

2、配液：用减压纯水将20倍溶缩洗衣剂液溶解成原倍的洗衣剂液。

3、加标准的品和待测样本量：取足以数量统计的酶标包被板，固定不变于框架结构上，分离设置成标品孔、待测模板孔和白页参考孔，见证各孔选址，在标品孔里加入标品50μL；待测样表孔中先建立待测样表10μL，再加上子样本扑灭液40μL（即模本溶解5倍）；空页比孔没有。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去粘液，容易吸水纸中拍干，每孔完成洗滌液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，吸水能力一张纸拍干，如此这般反复重复洗板4次（也该用洗板机按表示书基本操作洗板）。

6、加酶标任务液：每孔参加酶标任务液50μL，空白一片参考孔没有加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去粘液，储水A4纸拍干，每孔打满干洗液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，储水纸中拍干，越来越去重复洗板4次（也能够用洗板机按讲解书操作方法洗板）。

9、显色：每孔先入驻显色剂A 液50μL，另加入显色剂B液 50μL，pad混匀器混匀30s（或手摸轻柔地自激振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、结束：弄出来酶标板，每孔加停止液50μL，暂停不起作用（配色由蓝颜色立转呈黄色）。

11、检验：以白页孔调零，在终结后15秒钟内，用450nm吸光度在线测量各孔的吸光值（OD值）。

12、求算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【范本让】

1、样本量不能含叠氮钠（NaN₃），可能叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采摘采摘后尽快的做生成，生成按相应资料做，生成后肩负着快做研究。若不要完毕疲劳试验，可将组织切片放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、检测须严格依据说明怎么写书的运行实现，检测成果判断必要以酶标仪读数来算。

2、酶标包被板打开后后如未用完，应即时放进封严袋里添加常温、干燥剂导出。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、劳记范例已是调制5倍，计算方法但是乘于5算得范例实践含量。

5、本微生物培养基盒按量规模为0.25-8μg/L，高达此规模，为的标准曲线方程交叉估算所得到，不当作精准参考值报告单，试着特殊的做好稀释溶解工作液做好稀释溶解工作后核查精准报告单（0.25-8μg/L领域内），相乘总扑灭倍率就是样品zui终浓硫酸浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避开双向感染，准则品、模板和空白图片差表每加另一个要根换一天吸头；酶标工作中液、范本做好稀释工作液和底物等公共信息多组分，要悬臂加样，禁止碰上微小孔；不应连续选用封板膜。

8、化学药品盒保鲜期内利用，各不相同批号的化学药品禁止混用。

9、底物B对光特别敏感，防止长的时间段被暴露于光下。

【操作程序总结】

预备化学制剂，样件和标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【监测面积】

0.25μg/L - 8μg/L

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月