犬糖连抗原153（CA153）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

【采血管盒英文名称】

犬糖连抗原153（CA153）酶联免疫法检查采血管盒（ELISA）

【试剂盒贷款用途】

参考值测试犬血清、血浆及关联液體样板中糖连抗原153（CA153）的含碳量。

【检测基本原理】

本生化试剂盒用到双表面抗原二步夹心酶联免疫检测气体吸附法（ELISA）。将准则品、待测样板下载到要预先包被犬糖连抗原153（CA153）单克隆抗体阳性合理酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，加上入酶标事业液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过被铁的氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的角色下转化为浅黄色，颜色的深浅与样品中犬糖连抗原153（CA153）浓度呈正各种相关，450nm光波波长下测定法OD值，要根据条件品和图纸的OD值，估算样本量中犬糖连抗原153（CA153）含碳量。

【试剂盒分为】

备注栏：规格品（1号→6号）氨水浓度分别为：16、8、4、2、1、0.5 U/mL.

【需要而未可以提供的化学试剂和用品】

1、37℃恒温恒湿箱

2、规范标准样式酶标仪

3、高精密移液器及一回性吸头

4、水蒸气去离子水

5、单次性试管

6、储水纸

【操作步骤】

1、提供：从电冰箱去除化学药品盒，空调温度复温稳定平衡30一分钟。

2、配液：用蒸溜水将20倍浓缩液洗衣液调制成原倍的洗衣液。

3、加规定品和待测范本：取已经可以占比的酶标包被板，固定不变于结构上，分开 设置成条件品孔、待测样本量孔和空白的对比孔，信息各孔地方，在条件品孔添加入条件品50μL；待测样本量量孔中先入驻待测样本量量10μL，加个范本做好稀释工作液40μL（即子样本希释5倍）；白页参考孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液态物质，吸潮紙上拍干，每孔加完洗滌液，静置1min，甩去洗衣液，吸水性从纸拍干，这些再次洗板4次（也需用洗板机按证明书操作流程洗板）。

6、加酶标作业液：每孔申请加入酶标作业液50μL，空白页相较比较孔要加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液态物质，吸潮一张纸拍干，每孔打满洗涤剂液，静置1min，甩去洗洁液，吸湿书本上拍干，太过反复洗板4次（也可作洗板机按电子说明书书运营洗板）。

9、显色：每孔先假如显色剂A 液50μL，多加入显色剂B液 50μL，小米平板电脑混匀器混匀30s（或用力轻柔的振动混匀30s），37℃避光显色15min。

10、撤消：导出来酶标板，每孔加结束液50μL，解除作用（的颜色由淡蓝色立转黑色）。

11、校正：以空缺孔调零，在解除后1520分钟内，用450nm光的波长量测各孔的吸光值（OD值）。

12、确定：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样版必须】

1、模板不能含叠氮钠（NaN₃），根据叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、生物标本爬取后赶紧实现截取，截取按有关于论文资料实现，截取后承当快实现检验。若不许完毕检验，可将动物标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实验所报告安装严格安装使用手册怎么写书的作业参与，实验所报告结局界定应该以酶标仪读数应写。

2、酶标包被板河南开封后如未用完，应当即置入良好的密封性袋添加变干剂另存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、不忘初心样表现已就稀释5倍，估算结杲减去5这才是样例现实情况浓硫酸浓度。

5、本制剂盒按量依据为0.5-16U/mL，高达此位置，为标准规定申请这类卡种曲线提额延长计算增值税，不充当精确按量最终可是，一定要用特别配制液配制后分析精确最终可是（0.5-16U/mL规模内），减去总稀释溶液4的倍数既为样品zui终氧浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为尽量避免交叉点污染问题，标准规范品、模板和白页差表每加一款 也要换个连续吸头；酶标岗位液、模本希释液和底物等服务性混合物，要悬臂加样，不应见到砂芯过滤器；不得不再次食用封板膜。

8、微生物培养基盒保鲜期内使用的，不同的批号的微生物培养基不许混用。

9、底物B对光刺激性，避开长事件被暴露于光下。

【操作程序总结】

需备化学试剂，仿品和标准规定品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查重区间】

0.5U/mL - 16U/mL

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月