犬神经特异性烯醇化酶（NSE）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

【采血管盒明称】

犬中枢神经特异形烯醇化酶（NSE）化学发光法论文检测免疫试剂盒（ELISA）

【试剂盒适用范围】

一定量加测犬血清、血浆及重要性全自动样表中运动神经特情人烯醇化酶（NSE）的纯度。

【检测的工作原理】

本采血管盒用双免疫性抗体三步夹心酶联免疫性吸法（ELISA）。将准则品、待测模板引入到首先需要包被犬运动神经炎症因子朋友烯醇化酶（NSE）单克隆免疫抗体透亮酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，加个入酶标工作任务液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过钝化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的使用下转变成金色，颜色的深浅与样品中犬脑神经非特异朋友烯醇化酶（NSE）浓度呈正有关，450nm光谱下测得OD值，按照其基准品和原辅料的OD值，计算方法模板中犬中枢神经特情人烯醇化酶（NSE）含量。

【试剂盒组成了】

注：规范品（1号→6号）渗透压从左到右为：1600、800、400、200、100、50 ng/mL.

【必须要而未保证的制剂和设施】

1、37℃恒湿箱

2、要求样式酶标仪

3、精细移液器及一遍性吸头

4、水蒸气蒸溜水

5、多次性试管

6、吸附纸

【操作步骤】

1、做好准备：从保鲜柜抽出化学制剂盒，制冷复温取舍30分种。

2、配液：用蒸溜水将20倍高浓洗衣液溶解成原倍的洗衣液。

3、加条件品和待测样例：取足够的人数的酶标包被板，固定不变于构架上，各分为放置细则规定品孔、待测样表孔和空缺照表孔，记录时间各孔位置上，在细则规定品孔里加入细则规定品50μL；待测样品孔中先添加待测样品10μL，另加样本量就稀释液40μL（即样版兑水5倍）；一片空白差表孔要加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液状体，储水白纸拍干，每孔加注洗涤剂液，静置1min，甩去洗洁液，吸附纸里拍干，尽管多个洗板4次（也可以用洗板机按说明怎么写书操作方法洗板）。

6、加酶标作业液：每孔倒入酶标作业液50μL，空白处對照孔没加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液态体，容易吸水A4纸拍干，每孔满油洗衣液，静置1min，甩去洗條液，吸水能力书本上拍干，是这样的重复使用洗板4次（也要用洗板机按表明书实际操作洗板）。

9、显色：每孔先加盟显色剂A 液50μL，另加入显色剂B液 50μL，安卓平板混匀器混匀30s（或用力慢慢的谐振混匀30s），37℃避光显色15min。

10、撤销：抽出酶标板，每孔加结束液50μL，中断发生反应（顏色由颜色立转土黄色）。

11、测定法：以没字孔调零，在终结后15一分钟内，用450nm吸光度估测各孔的吸光值（OD值）。

12、核算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【子样本需要】

1、范本不能含叠氮钠（NaN₃），是由于叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、生物标本采摘后立刻去取出，取出按有关期刊论文去，取出后承当快去实验操作。若无法即刻耐压试验，可将标本采集放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、测试严苛以这使用说明书的操控展开，测试结果显示确定都要以酶标仪读数是以。

2、酶标包被板打开后后如未用完，应及时放进封好袋中放缺水剂存有。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、一定要记住模板都已经溶解稀释5倍，计算可是乘于5才称得上样本量事实有机废气浓度。

5、本化学药品盒一定量范围之内为50-1600ng/mL，高出此规模，为条件线性延申确定增值税，不当做明确无误一定量后果，请说出特别摇匀液摇匀后法测明确无误后果（50-1600ng/mL区间内），乘上总稀释溶解数倍其为模本zui终密度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免出现平行感染，标淮品、样本量和空白一片比较每加另一个便要更新1次吸头；酶标工作中液、模板配制液和底物等公众成分，要悬臂加样，不宜碰倒纳米纤维；不得当多次再用的封板膜。

8、化学免疫试剂盒质保期内安全使用，有所差异批号的化学免疫试剂不得当混用。

9、底物B对光敏锐，禁止长時间露出于光下。

【操作程序总结】

需要准备化学试剂，试品和条件品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查测时间范围】

50ng/mL – 1600ng/mL

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月