犬鳞状癌（SCC）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

微信备注名：原则品（1号→6号）溶液浓度顺次为：1600、800、400、200、100、50 pg/mL.

【可以而未作为的化学试剂和专业设备】

1、37℃衡温箱

2、标准单位样式酶标仪

3、精密铸造移液器及一下性吸头

4、减压蒸溜水

5、做次性试管

6、吸水性纸

【操作步骤】

1、预备：从雾化器拿出来生化试剂盒，高温复温平横30小时。

2、配液：用减压生理盐水将20倍果汁洗滌液稀释溶液成原倍的洗滌液。

3、加标品和待测子样本：取可以的数量的酶标包被板，固定不变于框架结构上，分开 设计标规定品孔、待测模板孔和白页相较比较孔，收录各孔座位，在标规定品孔里添加入标规定品50μL；待测样例孔中先加如待测样例10μL，多加子样本稀释溶液液40μL（即样本量直接稀释就可以5倍）；空白处对应孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液态物质，吸水能力从纸拍干，每孔打满洗滌液，静置1min，甩去洗條液，吸湿纸中拍干，是这样的反复重复洗板4次（也可以用在洗板机按使用手册怎么写书操作的洗板）。

6、加酶标任务液：每孔建立酶标任务液50μL，留白比对孔不加以。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去介质，储水纸中拍干，每孔满箱洗條液，静置1min，甩去洗洁液，容易吸水从纸拍干，是这样的重复使用洗板4次（也可洗板机按这电子说明书运营洗板）。

9、显色：每孔先放入显色剂A 液50μL，加个入显色剂B液 50μL，平板电脑混匀器混匀30s（或用手掌猛地谐振混匀30s），37℃避光显色15min。

10、解除：拿出酶标板，每孔加暂停液50μL，暂停响应（色调由白色立转成黄色）。

11、检验：以留白孔调零，在停止后15秒钟内，用450nm光波长在测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样品请求】

1、模本不能含叠氮钠（NaN₃），可能叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、生物标本导入后及时完成导入，导入按相关的医学文献完成，导入后应要快完成科学耐压。若不尽快耐压，可将样本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、工作严厉按讲解书的运行采取，工作毕竟确定就必须以酶标仪读数算起。

2、酶标包被板开口后如未用完，应会安装封口袋里添加非常干燥剂同步保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、争做合格党员样表早已溶解5倍，估算没想到相乘5这才是样品事实上浓硫酸浓度。

5、本微生物培养基盒降钙素原检测区域为50-1600pg/mL，超越此区间，为标淮的身材曲线覆盖计算出应纳税所得额，不当成准确无误性一定量后果，一定要用特殊的摇匀液摇匀后测试准确无误性后果（50-1600pg/mL领域内），乘上总溶解稀释陪数就是样例zui终浓硫酸浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为防范对称破坏，规范品、样表和空白的参考每加一款 就会撤换1次吸头；酶标运作液、样板配制液和底物等公开混合物，要悬臂加样，不得不遇见微小孔；不允许连续食用封板膜。

8、化学药品盒质保期内安全使用，各不相同批号的化学药品不得已混用。

9、底物B对光脆弱，避免出现长耗时曝露于光下。

【操作程序总结】

安排免疫试剂，样板和的标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查测标准】

50pg/mL - 1600pg/mL

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月