犬金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

备注栏：基准品（1号→6号）溶度逐个为：80、40、20、10、5、2.5 μg/L.

【是需要而未具备的微生物培养基和专业设备】

1、37℃控温箱

2、标准的规模酶标仪

3、精密铸造移液器及一些性吸头

4、分馏水

5、每次性试管

6、吸附纸

【操作步骤】

1、安排：从电冰箱拆下化学制剂盒，温度复温平横30分种。

2、配液：用水蒸气纯净水将20倍浓缩液干洗液调制成原倍的干洗液。

3、加标准单位品和待测范例：取非常总量的酶标包被板，不变于框架图上，依次设定规范的的品孔、待测模本孔和空白图片较孔，日志各孔定位，在规范的的品孔添加入规范的的品50μL；待测范例孔中先添加待测范例10μL，另加模本就稀释液40μL（即样版兑水5倍）；没字對照孔不加以。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去溶液，吸水能力纸中拍干，每孔加注洗條液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，吸湿一张纸拍干，是这样的相同洗板4次（也快速可用洗板机按原因分析书的操作洗板）。

6、加酶标做工作任务液：每孔入驻酶标做工作任务液50μL，空白处参考孔不放。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去溶剂，吸水性白纸拍干，每孔加完干洗液，静置1min，甩去清洗液，储水纸里拍干，这样反复洗板4次（也可作洗板机按说书实际操作洗板）。

9、显色：每孔先下载显色剂A 液50μL，另加入显色剂B液 50μL，小米平板电脑混匀器混匀30s（或用力轻抚谐振混匀30s），37℃避光显色15min。

10、终结：抽出酶标板，每孔加结束液50μL，撤消症状（的颜色由天蓝色立转米黄色）。

11、测试：以乱码孔调零，在中断后15一分钟内，用450nm光波波长量测各孔的吸光值（OD值）。

12、折算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【模板需要】

1、范例不能含叠氮钠（NaN₃），毕竟叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、疟原虫终端采集后赶紧展开添加，添加按想关医学文献展开，添加后承当快展开实践。若并不能尽快实验室检测，可将样本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、實驗严格的采用详细电子说明书的控制实现，實驗报告单判别必须要以酶标仪读数来算。

2、酶标包被板打开使用后如未用完，应会存入密封性袋里加吹干剂保存文档。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、谨记样本量已是兑水5倍，统计最终结果相乘5便是子样本现场溶度。

5、本化学制剂盒参考值条件为2.5-80μg/L，超出此比率，为要求曲线美覆盖计算的获得的，不当做精确定量分析数据，若要异常扑灭液扑灭后检测精确数据（2.5-80μg/L比率内），乘上总稀释液公倍数成为范本zui终有机废气浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为尽量不要交叉式污染问题，标准品、样本量和空白图片比对每加一款 总要修改一场吸头；酶标做工作液、子样本溶解稀释液和底物等公益性混合物，要悬臂加样，不能刮到微孔过滤；不准抄袭施用封板膜。

8、化学药品盒保鲜期内的使用，有所不同批号的化学药品不许混用。

9、底物B对光强烈，以免长的时间裸露于光下。

【操作程序总结】

开始准备免疫试剂，仿品和要求品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检查领域】

2.5μg/L – 80μg/L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月