犬基质金属蛋白酶9（MMP-9）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

犬栽培基质金属件蛋白酶酶9（MMP-9）化学发光法检侧免疫试剂盒（ELISA）

动用解释书

【试剂盒名称】

犬机质金属材质蛋白酶酶9（MMP-9）按量检验生化试剂盒（ELISA）

【试剂盒借款用途】

参考值检查测量犬血清、血浆及对应全自动样板中机质金屬球蛋白酶9（MMP-9）的含量。

【检测方式】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被犬基本材料材料核蛋白酶9（MMP-9）单克隆抵抗能力黑色酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，另加入酶标任务液，温育够时候后，洗衣机清洗去除未配合的化学成分。顺序加如底物A、B，底物（TMB）在辣根过阳极氮化合物酶（HRP）崔化下转化率为深蓝色物质，在酸的做用下变为土黄色，颜色的深浅与样品中犬机质复合蛋清酶9（MMP-9）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中犬产品复合蛋白酶酶9（MMP-9）含量。

【试剂盒组合成】

注：准则品（1号→6号）质量浓度从左到右为：120、60、30、15、7.5、3.75μg/L.

【都要而未供给的制剂和实验室设备】

1、37℃恒温性比较好箱

2、规范技术参数酶标仪

3、紧密移液器及第临时吸头

4、蒸溜水

5、1次性试管

6、容易吸水纸

【操作步骤】

1、备好：从墙上抽出生化试剂盒，常温复温稳定性30分钟左右。

2、配液：用蒸溜水将20倍浸提洗洁液稀释溶液成原倍的洗洁液。

3、加标准的品和待测样例：取满足占比的酶标包被板，固定不动于框架结构上，各快速设置规定规范品孔、待测范例孔和空白一片相较比较孔，纪要各孔部位，在规定规范品孔中放入规定规范品50μL；待测样表孔中先成为待测样表10μL，另加子样本扑灭液40μL（即样版掺水5倍）；留白比较孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去全自动，吸附纸里拍干，每孔打满洗條液，静置1min，甩去干洗液，吸潮一张纸拍干，这么抄袭洗板4次（也可以选择洗板机按说明怎么写书操作流程洗板）。

6、加酶标本职事情液：每孔融入酶标本职事情液50μL，一片空白比较孔没有。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去介质，吸潮一张纸拍干，每孔加注洗衣机清洗液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，容易吸水纸中拍干，这样一来连续洗板4次（也快速可用洗板机按解释书进行洗板）。

9、显色：每孔先参与显色剂A 液50μL，加个入显色剂B液 50μL，平板电脑混匀器混匀30s（或用手掌悄悄振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、停止：取掉酶标板，每孔加终结液50μL，结束体现（彩色由蓝绿色立转黄）。

11、校正：以空页孔调零，在中断后151分钟内，用450nm光谱检测各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【子样本耍求】

1、模板不能含叠氮钠（NaN₃），是由于叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、样本终端采集后早日使用导出，导出按重要性文章使用，导出后需承担快使用研究。若难以立马试验检测，可将动物标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、工作设计严要求遵循说书的使用操作使用，工作设计最后直接判断需求以酶标仪读数是以。

2、酶标包被板打开后如未用完，应即时放入隔绝袋里添加太干剂存有。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、一定要记住子样本就已调制5倍，计算结局乘上5也是样例真实浓度值。

5、本微生物培养基盒降钙素原检测区间为3.75-120μg/L，超此条件，为标等值线扩宽求算得到，不作为准确性的酶联免疫法毕竟，那可以用特异溶解溶解液溶解溶解后测定方法准确性的毕竟（3.75-120μg/L区域内），乘上总稀释溶解质数和合数仅以范本zui终质量浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为以免 交叉点环境破坏，规则品、模板和空白图片比较每加的就想拆换第一次吸头；酶标任务液、样版希释液和底物等共公类物质，要悬臂加样，不宜遇上微孔过滤；不应再次选择封板膜。

8、微生物培养基盒质保期内在使用，不相同批号的微生物培养基不恰混用。

9、底物B对光皮肤敏感，解决长时期曝光于光下。

【操作程序总结】

的准备免疫试剂，供试品和准则品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【查重领域】

  3.75μg/L - 120μg/L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月