大鼠Na-K-ATP酶定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

大鼠Na-K-ATP酶酶联免疫法查重生化试剂盒（ELISA）

实用表明书

【化学制剂盒标题】

大鼠Na-K-ATP酶降钙素原查重查重制剂盒（ELISA）

【试剂盒用处】

定量分析加测大鼠血清、血浆及涉及机构样例中Na-K-ATP酶的量。

【检测方式】

本免疫细胞试剂盒主要采用双抵抗能力2步夹心酶联免疫细胞吸附性法（ELISA）。将标准单位品、待测样品假如到首先需要包被大鼠Na-K-ATP酶单克隆免疫抗体半透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，加上入酶标本职工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过阳极非金属氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的意义下转变成米黄色，颜色的深浅与样品中大鼠Na-K-ATP酶浓度呈正涉及到，450nm可见光波长下法测定OD值，会按照规则品和合格品的OD值，确定模本里面大鼠Na-K-ATP酶水分含量。

【试剂盒组成的】

注：标淮品（1号→6号）盐浓度先后为：16、8、4、2、1、0.5 μmol/g

【必须要 而未出示的微生物培养基和设备】

1、37℃常温箱

2、细则规格参数酶标仪

3、精密铸造移液器及一场性吸头

4、水蒸气蒸溜水

5、多次性试管

6、吸潮纸

【操作步骤】

1、提供：从电冰柜导出来化学试剂盒，环境温度复温均衡性30一分钟。

2、配液：用蒸溜水将20倍浓缩咖啡清洗液稀释溶液成原倍的清洗液。

3、加标准规定品和待测模本：取任何比例的酶标包被板，固定的于构架上，分开 设立规格品孔、待测范例孔和白页参考孔，记录好各孔地址，在规格品孔里添加入规格品50μL；待测样品孔中先加盟待测样品10μL，加个样本量溶解稀释液40μL（即样板扑灭5倍）；空缺照表孔不带。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液态体，吸附从纸拍干，每孔完成洗滌液，静置1min，甩去干洗液，吸附纸中拍干，越来越重新洗板4次（也可作洗板机按说明怎么写书进行洗板）。

6、加酶标事情液：每孔进入酶标事情液50μL，空缺比较孔不带。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液，吸水能力从纸拍干，每孔写满洗衣液，静置1min，甩去干洗液，吸水能力A4纸拍干，这么按顺序洗板4次（也可洗板机按介绍书方法洗板）。

9、显色：每孔先引入显色剂A 液50μL，加上入显色剂B液 50μL，小米平板电脑混匀器混匀30s（或手摸轻柔地自激振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、中止：拿出酶标板，每孔加终结液50μL，中止反馈（色泽由天蓝色立转淡黄色）。

11、检测法：以一片空白孔调零，在中止后1515分钟内，用450nm光波波长在线测量各孔的吸光值（OD值）。

12、确定：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【范本要】

1、范本不能含叠氮钠（NaN₃），根据叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、样本收集后尽快及早来领取，领取按关于论文资料来，领取后尽义务快来调查。若并不能立刻做实验的时候，可将疟原虫放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、實驗须严格通过解释书的操作步骤来进行，實驗毕竟直接判断肯定以酶标仪读数应写。

2、酶标包被板开封市后如未用完，应可以放进密封胶袋里加非常干燥剂保存图片。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、记住样板已然摇匀5倍，算起效果×5是样本量预期溶度。

5、本微生物培养基盒一定量范畴为0.5-16μmol/g，超越此范畴，为标准的曲线美提升求算应纳税所得额，不算作明确参考值导致，若要非常规溶解液溶解后测量明确导致（0.5-16μmol/g超范围内），减去总做好稀释工作数倍既为范例zui终氧化还原电位。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免出现交叠环境污染，基准品、样版和白页参考每加一两个还要变更每次吸头；酶标事情液、子样本稀释溶液液和底物等公益性酚类化合物，要悬臂加样，不许碰见纳米纤维；没法反复重复选用封板膜。

8、实验采血管盒存放期内动用，其他批号的实验采血管不准混用。

9、底物B对光皮肤敏感，防止出现长久段爆出于光下。

【操作程序总结】

需备化学制剂，原材料和要求品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检查测量面积】

0.5μmol/g - 16μmol/g

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6六个月