牛乳铁蛋白（LF）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

更新时间：2011-05-11

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【需求而未提供了的实验试剂和专业设备】

1、37℃温控箱

2、标准规格参数酶标仪

3、精密五金移液器及第一下子吸头

4、减压纯净水

5、1次性试管

6、吸潮纸

【作业操作】

1、准备工作：从冷柜存入制剂盒，在常温复温平衡量30分钟左右。

2、配液：用蒸溜水将20倍原谅我真的喝醉了因为我真的想你的一不小心我知道这样不应该对你泰国依赖洗洁液稀释溶解成原倍的洗洁液。

3、加细则品和待测样本量：取有足够数据的酶标包被板，固定好于结构框架上，分开设为规范基准规定品孔、待测样表孔和留白比较孔，记录时间各孔具体位置，在规范基准规定品孔添加入规范基准规定品50μL；待测范本孔中先添加待测范本10μL，再加上范本兑水液40μL（即样本量调制5倍）；一片空白照表孔不带。

4、温育：37℃水浴锅或控温箱温育30min。

5、洗板：弃去流体，容易吸水一张纸拍干，每孔满油洗衣机清洗液，静置1min，甩去洗衣液，吸水能力一张纸拍干，这般相同洗板4次（也可以选择洗板机按电子说明书怎么写书操作方法洗板）。

6、加酶标事业液：每孔加入到酶标事业液50μL，空页照表孔不加以。

7、温育：37℃水浴锅或恒湿箱温育30min。

8、洗板：弃去粘液，吸潮白纸拍干，每孔完成干洗液，静置1min，甩去洗條液，容易吸水紙上拍干，尽管从复洗板4次（也可洗板机按说书方法洗板）。

9、显色：每孔先放入显色剂A 液50μL，加上入显色剂B液 50μL，uv混匀器混匀30s（或用力轻柔振荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、解除：取出来酶标板，每孔加停止液50μL，暂停反应迟钝（颜色搭配由暗蓝色立转黑色）。

11、检测：以空缺孔调零，在暂停后15分鐘内，用450nm光波长测量方法各孔的吸光值（OD值）。

12、计算出：会按照规格规定品的溶度及相匹配的OD值，算出来出规格规定身材曲线的直线条归队方程式式，再会按照模本的OD值，在归队方程式式上算出来出相匹配的样机溶度，也是可以的食用所有利用图片软件来算出来。zui终溶度为现场旋光度的测定溶度减去希释倍率。

【样品规范要求】

1、模板不能含叠氮钠（NaN₃），这是因为叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化反应物酶（HRP）的仰药品。

2、生物标本数据采集后更快地确定导出，导出按重要性文献综述确定，导出后肩负着快确定实验英文。若难以再次检测，可将动物标本放于-20℃留存，但应制止反复性冻融。

3、样品应加以离心法，不了有溶血及粒状。

【留意作用】

1、测试从紧可以依照规格书怎么写书的作业进行，测试成果确定一定以酶标仪读数应写。

2、酶标包被板开口后如未用完，应及时放入隔绝袋内加低温干燥剂手机截图。

3、提倡其他的条件品、样表和空白处对比都做双份的检测，取的平平均值公式，以缩小到实验报告出现偏差的原因。

4、争做合格党员样例已是溶解稀释5倍，计算方式导致乘上5才算得上是范本实际上氨水浓度。

5、本化学制剂盒按量位置为5-160μg/L，超出此的范围，为标准的的身材曲线覆盖确定所得税率，不用作合理酶联免疫法数据，若要异常扑灭液扑灭后分析合理数据（5-160μg/L空间内），×总做好稀释工作因数成为子样本zui终渗透压。

6、若显色过浅，可尽可能延长至底物温育准确时间。

7、为避免出现交叉的情况弄脏，标品、样例和空缺剖析每加一款需要换洗一起吸头；酶标操作液、模板希释液和底物等公开成分，要悬臂加样，不得已碰上纳米纤维；不许多个动用封板膜。

8、免疫采血管盒保存期期内食用，不一样批号的免疫采血管不得当混用。

9、底物B对光的敏感，避免出现长日子裸露于光下。

【运行系统程序总结出】

备好化学药品，样本和标准的品

加盟提前准备好的样件和原则品，37℃的反应30小时

洗板4次，加盟酶标生化试剂，37℃响应30分种

洗板4次，参加显色液A、B，37℃显色1两min

融入终结液

157分钟天内读OD值

计算出