牛活性维生素D3（VD3）Elisa试剂盒说明书

1、预备：从洗衣机导出来制剂盒，在常温复温静态平衡30秒钟。

2、配液：用分馏水将20倍浓缩液洗條液配制成原倍的洗條液。

3、加标准化品和待测子样本：取可以數量的酶标包被板，稳定于架构上，各分为设计基准品孔、待测样本量孔和一片空白比孔，记录卡各孔角度，在基准品孔添加入基准品50μL；待测范例孔中先加如待测范例10μL，加上模本掺水液40μL（即模本稀释溶解5倍）；空白一片参考孔不放。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液状体，吸水性紙上拍干，每孔满油洗洁液，静置1min，甩去洗衣机清洗液，吸附纸中拍干，这么多次洗板4次（也适用洗板机按原因分析书操作使用洗板）。

6、加酶标运转上液：每孔加盟酶标运转上液50μL，白页比较孔没有加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液状体，吸水能力一张纸拍干，每孔加完洗衣液，静置1min，甩去洗條液，储水紙上拍干，都是这样抄袭洗板4次（也能够用洗板机按代表书进行操作洗板）。

9、显色：每孔先倒入显色剂A 液50μL，后加入显色剂B液 50μL，安卓平板混匀器混匀30s（或拿手轻松股票震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、停止：取出来酶标板，每孔加撤销液50μL，中止反馈（外表颜色由黑色立转黑色）。

11、测定方法：以没字孔调零，在解除后15几分钟内，用450nm吸光度侧量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算方法：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【模板规定】

1、样表不能含叠氮钠（NaN₃），因此叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、生物标本终端采集后提早去提炼，提炼按想关专著去，提炼后需承担快去检测。若不可以立刻冲击试验，可将样本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、检测严格要求安装原因分析书的操控确定，检测后果断定必需以酶标仪读数算起。

2、酶标包被板开封市后如未用完，应之后放到密封胶袋里添加非常干燥剂保持。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、谨记样本量就已经 就稀释5倍，换算的结果减去5才样品具体氧浓度。

5、本化学药品盒化学发光法范围图为25-800μg/L，突破此位置，为细则的曲线交叉折算应纳税所得额，不算作最准一定量但是，若要层次性配制液液配制液后检验最准但是（25-800μg/L面积内），乘上总稀释液因数当以样例zui终盐浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为应对交错式破坏，规定品、样品和空白一片差表每加的便要变更做次吸头；酶标操作液、样板溶解稀释液和底物等共公多组分，要悬臂加样，不宜碰倒微孔板；不得当多个在使用封板膜。

8、制剂盒存放期内采用，各个批号的制剂没法混用。

9、底物B对光过敏，以免 长时段曝露于光下。

【操作程序总结】

预备免疫试剂，试样和的标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【在线检测超范围】

25μg/L- 800μg/L

【规格】

48人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月