YIJI细菌碱性磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

YIJI细菌碱性磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI细菌碱性磷酸酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物对硝基苯磷酸受到碱性磷酸酶的水解，产生有色产物，在分光光度仪下，其吸光峰值的变化，即采用比色法定量测定细菌样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌菌株（野生或培养）裂解样品碱性磷酸酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。

技术背景

碱性磷酸酶（Alkaline Phophatase；ALP；EC3.1.3.1）存在于许多细菌细胞中的外周膜结合性酶，为同源二聚体金属性酶蛋白。一旦细菌的磷浓度过低，则诱导碱性磷酸酶的活性，其功能在于参与细菌磷代谢。在分子生物学和免疫学实验和诊断运用中，碱性磷酸酶成为一种重要的工具。碱性磷酸酶在碱性条件下水解单磷酸。基于底物对硝基苯磷酸（p-nitrophenyl phosphate；PNPP），在碱性磷酸酶的催化水解下，释放出对硝基苯酚（p-nitrophenol）和磷酸（phosphate），通过分光光度仪检测对硝基苯酚（410nm），来定量测定碱性磷酸酶的活性。碱性磷酸酶反应系统为：

Alkaline Phophatase

p-nitrophenyl phosphate  +  H2O    →   p-nitrophenol  +  inorganic phosphate

产品内容

YIJI裂解液（Reagent A）    10毫升

YIJI活性液（Reagent B） 250微升

YIJI缓冲液（Reagent C）  20毫升

YIJI反应液（Reagent D）   2毫升

产品说明书      1份

保存方式

保存YIJI活性液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃微波炉里；YIJI反应液（Reagent D）避免光照；有效保证3月；一旦打开使用，有效保证1至2月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品保存的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

（微型）台式离心机：用于样品制备

比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、 样品准备

1． 准备好10毫升待测的细菌 

2． 转移到15毫升锥形离心管

3． 放进4℃台式电脑离心法力机离心法力10分钟，速度为7000g

4． 小心抽去上清液

5． 加入500微升YIJI裂解液（Reagent A），充分混匀

6． 转移到预冷的1.5毫升离心管

7． 加入12.5微升YIJI活性液（Reagent B）

8． 强力涡旋震荡15秒

9． 置于冰槽里15分钟

10． 放进4℃小型空气开关台式电脑离心式式机离心式式15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

11． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

12． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－YIJI30030.1）

13． 即刻放进－70℃存为或移至冰槽里依然以后操控

二、 测读准备

1．开启分光光度仪预热

2．设定好分光光度仪：温度37℃，激发光谱410nm，间隔60秒，测读6次（共5分钟），并置零

3．YIJI缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

三、背景对照测定

1． 移取880微升YIJI缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2． 加入100微升YIJI反应液（Reagent D）

3． 在37℃温度下孵育3分钟

4． 加入20微升YIJI清理液（Reagent A） 

5． 上下倾倒数次，混匀（5秒钟内）

6． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（5分钟读数－0分钟读数）

四、样品测定

1． 移取880微升YIJI缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2． 加入100微升YIJI反应液（Reagent D）

3． 在37℃温度下孵育3分钟

4． 加入20微升待测样品（注意：建议总量20微克细胞总蛋白）

5． 即刻上下倾倒数次，混匀（5秒钟内）

6． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（5分钟读数－0分钟读数）   

五、 计算样品活性

【（样品读数－背景读数）X 1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.02（样品容量；毫升）X 15.46（毫摩尔吸光系数）X 5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克

单位＝微摩尔对硝基苯磷酸/分钟

六、 酶标仪测定

1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品

2． 分别移取220微升YIJI缓冲液（Reagent C）到所有孔里

3． 分别加入25微升YIJI反应液（Reagent D）到所有孔里

4． 在37℃温度下孵育3分钟

5． 分别加入5微升YIJI清理液（Reagent A）或待测样品（10微克细胞总蛋白）到相应孔里（注意：样品须清澈）

6． 轻轻摇动96孔板

7． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和5分钟读数

8． 活性计算

[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 0.25（体系容量；毫升）]÷[0.005（样品容量；毫升）X 15.46（毫摩尔吸光系数）X 0.6（光径距离；厘米）X 5（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克 

单位＝微摩尔对硝基苯磷酸/分钟

注意事项

1． 本产品为20次（比色皿）或80次（96孔板）操作，包括背景对照

2． 操作时，须戴手套

3． 样品避免使用磷酸盐缓冲溶液和EDTA等处理

4． 系统操作过程中，背景测定只需1次

5． 加入样品后5秒内进行比色测定

6． 比色测定后，比色皿须清洗*

7． 样本测定吸光读数升高表明具有酶活性

8． 样品测定可以持续5分钟；计算活性时，可以选择其中单位时间（1分钟）的线性zui大吸光读数差值作为样本读数

9． 碱性磷酸酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH 8.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）水解1微摩尔对硝基苯磷酸

10． 建议待测样本总蛋白浓度为10至20微克/20微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量（本公司提供YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒YIJI30030.1）

11． 本公司提供系列磷酸化酶学检测试剂产品

单组份订购信息

编号 名称 规格

YIJI50050.4 YIJI细菌碱性磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒 20次

YIJI50050.4A YIJI裂解

YIJI病毒典型的含碱磷酸酶亲水性比色法律规定量检测工具化学制剂盒软件这产品说明（常常版）

主要使应用场景

YIJI大肠杆菌酸碱度磷酸酶活力比色法定性量检测工具化学制剂都是种契机能够底物对硝基苯磷酸深受是碱性的磷酸酶的淀粉水解，造成彩色化合物，在分光光度仪下，其吸光基线的变动，即适用比色法一定量测定方法病毒检样中酶抗逆性的而金典的技术设备步骤。该技术经由潜心开发、成功的英文实践认定书的。其不适适用所有螨虫菌株（纯天然或养育）裂解合格品典型的含碱磷酸酶的抗逆性在线检测。企业产品严格执行无菌检测，即到即用，活医考测，运作简单，效能固定。

科技底色

典型的含碱磷酸酶（Alkaline Phophatase；ALP；EC3.1.3.1）留存于大部分微生物体内部中的外周膜融入性酶，为同源二聚体五金性酶核蛋白。迟早会微生物体的磷有机废气浓度过低，则成脂强碱磷酸酶的吸附性，其实用功能举例说明体验微生物体磷消化吸收。在大分子生物体学和免疫抗体学實驗和判断借助中，强碱磷酸酶被选为一个首要的器具。典型的含碱磷酸酶在典型的含碱具体条件下水管解单磷酸。因为底物对硝基苯磷酸（p-nitrophenyl phosphate；PNPP），在偏碱磷酸酶的离子液体溶解下，发出出对硝基苯酚（p-nitrophenol）和磷酸（phosphate），按照分光光度仪测试对硝基苯酚（410nm），来参考值分析碱磷酸酶的活性氧。含碱磷酸酶化学反应控制系统为：

Alkaline Phophatase

p-nitrophenyl phosphate  +  H2O    →   p-nitrophenol  +  inorganic phosphate

服务游戏内容

YIJI裂解液（Reagent A）    10毫升

YIJI抗逆性液（Reagent B） 250微升

YIJI响应液（Reagent C）  20毫升

YIJI响应液（Reagent D）   2毫升

类产品表明书      1份

保存图片方式英文

维持YIJI渗透性液（Reagent B）在－20℃保鲜柜里，其中的上传在4℃墙上里；YIJI症状液（Reagent D）以免 照射；管用保证质量3月；已经点开便用，能够能保证1至2月

手机用户自购

1.5毫升抽滤管：应用在原辅料保持的容器类

15毫升椎型离心分离管：用在印刷品基本操作的不锈钢容器

（微形）台式一体机离心式机：广泛用于土样化学合成

比色皿或96孔板：使用在比色的收纳空间

分光光度仪或酶标仪：应用在比色研究分析

实验报告进行

• 试样准备工作

• 需备好10毫升待测的有害菌 
• 转意到15毫升椎型离心法管
• 装入4℃台式电脑抽滤机抽滤107分钟，车速为7000g
• 细心抽去上清液
• 加如500微升YIJI裂解液（Reagent A），完全混匀
• 转变到预冷的1.5毫升离心式管
• 注入12.5微升YIJI吸附性液（Reagent B）
• 双固涡旋压缩机阻尼振荡15秒
• 放在冰槽里1530分钟
• 放在4℃小型空气开关台式电脑离心力法机离心力法15一分钟，速度快为16000g（或13000RPM，举个例子eppendorf 5415）
• 安全教案小班移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升抽滤管
• 移取10微升采取淀粉酶定量分析在线检测（主意：提倡动用YIJI Bradford淀粉酶质含量参考值生化试剂盒－YIJI30030.1）
• 现在放在－70℃存放或放置冰槽里再次后面使用

• 测读需备

1．关闭分光光度仪升温

2．调节好分光光度仪：气温37℃，光波长410nm，接连60秒，测读6次（共5分鐘），并置零

3．YIJI缓冲器液（Reagent C）在常温下平均室温

三、时代背景比较旋光度的测定

• 移取880微升YIJI储存液（Reagent C）到新的比色皿
• 建立100微升YIJI表现液（Reagent D）
• 在37℃温湿度下孵育三分钟
• 成为20微升YIJI清除垃圾液（Reagent A） 
• 横竖乱倒屡次，混匀（5分钟内）
• 立刻放进去分光光度仪验测，此为图片背景空剖析（51分钟读数－0分读数）

四、样本判断

• 移取880微升YIJI缓冲器液（Reagent C）到新的比色皿
• 加进100微升YIJI想法液（Reagent D）
• 在37℃温度因素下孵育1分钟
• 进入20微升待测样品管理（还要注意：觉得占有量20微克细胞核总蛋白酶）
• 马上上下左右坍塌多次，混匀（5几秒钟内）
• 立刻放入分光光度仪检侧，此为样板读数（5min读数－0min读数）   

• 计算原材料生物

【（仿品读数－历史背景读数）X 1（管理体系存储空间；毫升）X图纸溶解公倍数】÷【0.02（样本储存量；毫升）X 15.46（毫摩尔吸光比率）X 5（影响时候；分钟的英文）】＝基层单位/毫升÷（检样淀粉酶密度）毫克/毫升＝方/毫克

计量单位＝微摩尔对硝基苯磷酸/15分钟

• 酶标仪检测法

• 在96孔板上开展以及标示：情况剖析和合格品
• 分辨移取220微升YIJI降低液（Reagent C）到一切孔里
• 分別假如25微升YIJI响应液（Reagent D）到各个孔里
• 在37℃热度下孵育8分钟
• 分别是放入5微升YIJI去除液（Reagent A）或待测原材料（10微克神经元总蛋白质）到合适孔里（提前准备：仿品须清澈见底）
• 悄悄摇晃96孔板
• 现在放在酶标仪验测：0分钟的英文读数和515分钟读数
• 可溶性测算

[（样本读数－的背景读数）X产品的样品直接稀释就可以公倍数X 0.25（指标体系功率；毫升）]÷[0.005（土样容积；毫升）X 15.46（毫摩尔吸光标准值）X 0.6（光径长距离；Cm）X 5（反映事件；1分钟）]＝行业/毫升÷（原辅料血清氧浓度）毫克/毫升＝计量单位/毫克 

行业＝微摩尔对硝基苯磷酸/min

留意地方

• 本设备为20次（比色皿）或80次（96孔板）操作流程，收录大环境對照
• 操作使用时，须戴半指手套
• 检样防止出现应用聚磷酸盐储存稀硫酸和EDTA等加工
• 设计方法过程中 中，视频背景测试只需1次
• 放入打样定制后5秒内通过比色测定方法
• 比色分析后，比色皿须刷洗*
• 范本检验吸光读数身高证明拥有酶特异性
• 样品英文测定方法会连续5分钟的准确时间；折算活性氧时，还可以挑选但其中组织准确时间（115分钟）的非线性zui大吸光读数差值身为样本量读数
• 酸碱性磷酸酶活力标准盐浓度判定：在37℃高温下，pH 8.0的状态下，每公司的酶在公司的時间内（每半小时）淀粉水解1微摩尔对硝基苯磷酸
• 改进措施待测样板量总蛋白质盐浓度为10至20微克/20微升；这样样板量酶灵活性过低或过高，则行增大或大幅度降低样板量量（本机构提供数据YIJI Bradford蛋清质含量参考值制剂盒YIJI30030.1）
• 本总部给出产品设备磷碱化酶学检则采血管产品设备

单组份预定企业信息

代码 名号 规格参数

YIJI50050.4 YIJI日常细菌偏碱性磷酸酶活性酶比色规定量检查化学试剂盒 20次

YIJI50050.4A YIJI裂解液（Reagent A）     50毫升

YIJI50050.4B YIJI活力性液（Reagent B）      1毫升

YIJI50050.4C YIJI缓冲区液（Reagent C）     100毫升

YIJI50050.4D YIJI反响液（Reagent D）      50毫升

YIJI30030.1 YIJI Bradford蛋清质氧浓度定量分析免疫试剂盒 100次

液（Reagent A）     50毫升

YIJI50050.4B YIJI活性液（Reagent B）      1毫升

YIJI50050.4C YIJI缓冲液（Reagent C）     100毫升

YIJI50050.4D YIJI反应液（Reagent D）      50毫升

YIJI30030.1 YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次