沙丁胺醇检测试剂盒

沙丁胺醇检测试剂盒使用说明书

（酶联免疫法）

 1 原理及用途

本免疫试剂盒选用相互竟争ELISA的方式检测工具尿样、组织性、预混料等子样本中的沙丁胺醇（Salbutamol，SAL），实验微生物培养基盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶符号物、抗原、的准则品非常他配备实验微生物培养基成分。验测时，建立的准则品或试品盐溶液，样表量量中的沙丁胺醇和酶标板上预包被偶联抗原之间的竞争抗沙丁胺醇抗原，建立酶符号物后，用TMB底物显色，样表量量吸光度值二者包含沙丁胺醇含量成负涉及，与的准则申请这类卡种曲线提额较好就可断定样表量量中沙丁胺醇的留下量。

2 技术指标

2.1 化学制剂盒准确度度：0.1ppb(ng/ml)

2.2 不起作用经济模式：25℃，30min～15min

2.3 查重临界点：

阴道分泌物、机构………………………0.1ppb

饲料添加剂………………………………1ppb

2.4 是交叉现象率：

沙丁胺醇…………………………100%

硫酸多巴酚丁胺…………………7.2%

西马特罗…………………………0.1%

克伦特罗…………………………3.6%

莱克多巴胺………………………0.1% 

肾上腺素…………………………0.1%

异丙肾上腺素……………………<1%

 2.5 样板回收公司率：

尿样……………………………………90%±10% 

组织结构……………………………………80%±10% 

祠料……………………………………80%±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

规则液：各1ml

0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

高标液（红盖）：100ppb………1ml

酶图标物（红盖）…………………5.5ml

抗体阳性业务液（蓝盖）………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

撤销液（黄盖）………………………6ml

20X高浓洗條液（白盖）……………40ml

10X复饱和溶液(黄盖)…………………50ml

就使用说明………………………………1份

4 需要的器材和试剂

4.1 实验仪器：酶标仪、缩印机、均质器 、N2擦干平衡装置、震荡器、抽滤机、标尺刻度移液管、天坪（感量0.01g）

4.2 进样器移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 采血管：氢氧化反应钠、乙酸乙酯、浓HCl、乙腈、异丙醇、正己烷、无水盐酸钠 

5 样本前处理

5.1 样本量整理前需知：

工作器材一定要清洁并运行连续性吸头，以防范污染问题打扰工作导致。

5.2 配液：

配液1：1M硝酸饱和溶液

    称取8.6ml浓HCl加去铁离子水至100ml。

配液2：1M NaOH 液体

    称取4g NaOH加去铝离子水至100ml。

配液3：复盐溶液

    将10×复液体用去铝离子水10倍调制，在范本的复溶，复液体在4℃自然环境可维持另一六个月。

5.3 范例前进行处理布骤：

5.3.1 尿样本处理方法

    随时取50µl清亮尿样进行核查（絮状物尿样还要过滤水或经4000r/min离心力5min，以赢得清亮尿样），暂不用的范本应速冻保管。

    尿样本稀释倍数：1    检测下限：0.1ppb

5.3.2 组织样本处理方法一：

   称取均质后的安排样品量2±0.05g ，入驻6ml复液体，彻底的振动2min，室内温度4000r/min上述离心力式10min (若安排样品量中植物油脂含锌量较高，可在振动后放进85℃水浴10min后再离心力式)。取50µl上清液实施浅析。

样本稀释倍数：4    检测下限：0.4ppb

5.3.3 组织样本处理方法二：

1） 称取均质后的组织开展模板2±0.05g ，加如1ml复饱和溶液，振动器混匀后加如4ml乙腈，振动器混匀后加如1ml异丙醇，宽裕振动器5min，环境温度4000r/min以上的离心分离10min；

2） 取上清液3ml，倒入50ul 1M NaOH，倒入7ml乙酸乙酯，加以谐振5min，环境温度4000r/min以上的离心法10min，取全上清在56℃必要条件下惰性气体或自然空气流吹至*低温干燥；

3） 放入1ml 复水溶液融掉干躁的无残留物，放入1ml正己烷相混30s ；15℃ 4000转/分 往上离心力5min。

4） 取50µl上层液对其进行浅析。

组织样本稀释倍数：1    检测下限：0.1ppb

5.3.4 饲料样本处理方法：

1）称取均质后的牛饲料打样定制1.0±0.05g，加入到10ml甲醇，另加入到5g无水氢氧化钾钠，震荡2min；环境温度 4000r/min大于抽滤10min；

2）吸出离心式分离后的上清液1ml，于56℃惰性气体吹头，用1 ml复氢氧化钠溶液充分均匀溶解干的残渣物，后加入1mL正己烷混和30s；制冷4000r/min上文离心式分离5min。

3）取50µl中下层来进行剖析。

    样本稀释倍数：10    检测下限：1ppb

6 酶联免疫试验步骤

    将要求化学制剂从4℃保鲜环保中去除来，置放制冷平衡性30min以上内容, 洗洁液保鲜时可能性都会有沉淀需恢复原状到制冷以全面溶水，各种液化学制剂的使用前均须摇匀。去除来要求规模的微小孔板及眼镜框架，将免去的微小孔板加入自封袋，永久保存于2-8℃。

实验设计准备前，用去阴离子水将20×原谅我真的喝醉了 因为我真的想你的 一不小心 我知道这样不应该 对你泰国依赖 洗條液按20倍调制成任务洗條液。

6.1 编    号：将模本和规定品匹配微孔板按序编码，不同模本和规定品做2孔垂直，并记下规定孔和模本孔位于的地点。

6.2 加样反应：加规范标准品或范例50µl/孔到自身的微孔板中，然而加酶标出物50µl/孔，多加入50µl/孔的抗原工作中液，用橡胶条膜封板，轻柔地振动5秒混匀，25℃不良反应3015分钟。

6.3 洗    涤：小心一点撕下档板膜，将孔内固态脱干，工伤保险作清洗液250µl/孔全面清洗5次，没次距离5分钟，用吸潮纸拍干（拍干后未被彻底清除的起泡可以用在清洗的枪头划破）。

6.4 显    色：每孔参与底物液A 50µl，后加底物液B 50µl，莞然谐振5秒混匀，25℃避光显色1两30分钟。

6.5 终    止：每孔进入中断液50µl，悄悄的谐振混匀，中断作用。

6.6 测吸光值：用酶标仪于450nm处校正每孔吸光度值（可以用双光波波长450/630nm）。校正应在终结体现后10分内结束。

7 结果分析

7.1 百分吸光率的计算出

    要求化液或子模板的百分吸光率相等于要求化液或子模板的百分吸光度值的评标准规范差（双孔）除了*个要求化液（0ppb）的吸光度值，再相乘100%，即

A—规范盐盐溶液或样例盐盐溶液的大概吸光度值

A0—0ppb标饱和溶液的均匀吸光度值

7.2 的标准弧线的作图与来计算

    以条件液百分吸光比率纵方位角系，应对的条件液氧盐渗透压（ppb）的常用常用对数为横方位角系，绘出条件液的半常用常用对数的直线。将样版的百分吸光率代入条件的直线中，从条件的直网上读出样版所应对的氧盐渗透压，相乘其应对的做好稀释工作倍率其为样版中待测物的事实上氧盐渗透压。

    若利于化学试剂盒职业 数据深入分析图片软件使用求算，更更加方便非常多子样本的明确、快数据深入分析。（得到）

8 注意事项

8.1 恒温降至25℃或微生物培养基及子样本不会回家后恒温（25℃）会造成所以标准规定的OD值较低。

8.2 在洗板流程中如若造成板孔潮湿的具体情况，则会造成标准的斜率没办法平滑，反复性不方便的的现象。因此洗板拍干后应请马上实施下一点操作流程。

8.3 融合要均衡，洗板要*，在ELISA剖析中的逆转性，很高限度上考量于洗板的稳定性、完整性性。

8.4 在全部孵育步骤中，用侧板膜来封印微孔过滤板，应对光照照晒。

8.5 别食用又过了有用期的微生物培养基盒，别交流食用其他批号微生物培养基盒中的微生物培养基。

8.6 显色液若有一点色调揭示变质，不得弃之。0规格的吸光度值小于等于0.五类机关单位（A450nm< 0.5 ）时，表达出来化学制剂几率变质。

8.7 反映解除液有腐蚀不锈钢性，不要接触到皮。

9 贮藏及保存期

存储生活条件：化学制剂盒于2-8℃存有，防范微冻。

保 质 期：该的产品效果期为3年，生产制造年份见打包盒。